天然植物阻抑瘤细胞靶基因表达对癌瘤生长控制地研究.pdfVIP

天然植物阻抑瘤细胞靶基因表达对 癌瘤生长控制的研究。 Raab如ub F1 睬剑妊1 N1-hthy 曾盏新3 陈穗峰2 邝珠玑3 黄玫玲3张硗实3张锋3叶燕丽3各雨3 (1_美国㈨o幽大学肿瘤中心；2．广州公用事业局医务室；3中山医科大学胂擅中心广州5i0060) 药物对有害基因表达的控制，是当前基础肿瘤学中的一个前沿研究领域。它的特色 是从基因水平有选择地去控制、关闭或阻断有害基因，从而达到抗癌的目的。近年来，基 因控制策略已由泛指的攻击瘤细胞DNA合成与表达的环节，到深人研究天然产物(植物 等)调控癌细胞内有害基因的表达；并由癌基因靶_lJ拓展到病毒基因靶拉J，因此，在防治 肿瘤机制研究中更加有针对性。 近年研究表明，在鼻咽癌的发生和发展中，癌基因(H_ras、c．myc)和EB病毒(髓lv)的 潜伏基因(LM噼等)起着重作用【21]。能否通过抑阻隐伏在人体内有害的病毒基因和突 变的癌基因，寻找新的抗癌植物药物，去达到防治癌症的目的，目前尚待探索。本文着重 探讨景天科植物是否有选择地修饰或阻断隐匿在人机体细胞内EBv潜伏性膜蛋白基因 mernbmne (1at∞t pToteingem，Lh口)和c—myc癌基因，为天然植物控制癌细胞关键的恶 性转化基因寻找抗癌药物提供依据。 1材料和方法 1．1细胞系 1．1．1c1936细胞系由中山医科大学肿瘤研究所建立和保存的髓v转化淋巴细胞 系[20]，来自鼻咽癌病人外周血淋巴细胞，经体外自发性转化并携带广州地区EBV亚株。 J。 经DNA测序c1936具有中国南方EBv广州亚株的u胆序列【3 1．1．2珊5．8细胞系B斌ein实验室惠赠，本室保存。人工感染磁jv转化的绒猴淋 LA伊基因。 巴细胞，携带EBv 1．1．3加L60细胞系人急性早粒白血病细胞成株，本室保存。 以上三个细胞系的癌基因c—myc均过度扩增。 1．2天然植物 在细胞培养过程中，设立对照组和实验组，后者在培液中加人干扰细胞的因子为天然 植物满堂红(j(以。”曲m 6￡m艰埘缸m，KB)，为景天科伽兰莱属植物的提取物(化学有效成 分另报道)，观察干扰瘤细胞凝集和下调癌基因或病毒基因，以及观察细胞生长抑制现象。 ①广东省医学科学“五十一工程”重点项目、国家重点基础研究项目“973”计划赍助。 ·227 1．3诱导细胞凝集试验 1．3．1诱导凝集因子 在上述细胞培养中，转化细胞或瘤细胞在体外悬浮生长过程 100旭／“终浓度)时，可诱导明显的细胞悬浮集落的凝集团块(诱导凝集)[8】。 1．3．2细胞悬浮集落的观测 该技术由本实验建立[218，…，观测细胞体外培养中悬浮 生长状态，转化细胞呈自发性或诱发性凝集的集落形成，为其重要生长特性。 应用缩时相差显微摄影仪(t．衄e Iapsephp。ontrast 作活细胞观测。将整瓶细胞安放人该仪的小温室内，用相差显微镜作活细胞观察。细胞 凝集表型：以最大10个凝集团块作体积总和计算。方法：在该仪底座的测量视野三重方 格，实验24h描图。在三重方格划线内一般凝集团块呈不整圆形，再用显微尺量出不整圆 形之最长半径(R)和最短半径(^)，代人公式求得体积参数。 ， 1 、 体积参数=丌^IR一{^l，H为圆周率=3．1416 t J ， 1．4细胞生长抑制试验 用KB处理三种细胞，以20旭／I“的最终浓度配制细胞培养液，每种细胞实验组(加 KB)和对照组各设10瓶，振荡使之混悬和分散细胞。每瓶细胞数2×105／甜，第二天起计 数，台盼蓝计算生长抑制率。 细胞生长抑制率=(Nn—N)×(Nn一^『0)×100％ 式中^b为开始接种时的活细胞数，N为实验组细胞培养～天后的活细胞数，N，t为 对照组细胞实验