西瓜抗枯萎病基因连锁的分子标记地研究.pdfVIP

西瓜抗枯萎病基因连锁的分子标记的研究① 许 勇 张海英康国斌 范 敏 王永健 陈 杭 (国家蔬菜工程技术研究中心，北京100089) 提要运用随机扩增多态性DNA(Rand锄amp曲edp0】蛐。础ie硎A，RAPD)与简单重复 序列(SiD堪e 行了西瓜野生种质(盘n地“2肌越m v盯cf泐池s)P圆B41抗枯萎病基因连锁的分子标记研究。 采用浸根法对西瓜抗病材料腿9634I与感病材料卯103。及其F2群体105个单株进行苗期抗枯 萎病生理小种1鉴定，构建了抗病基因池与感病基因池，通过RAPD与ssR多态性分析，找到了 一个分子连锁标记0PP0l门∞与抗病基因连键，其遗传距离为3．O厘摩(唧曲n唧阁，枷)。 关键词西瓜；抗枯萎病；随机扩增多态性DNA(RAPD)；简单重复序列(ssR) 西瓜枯萎病是一种土传的毁灭性病害，是世界范围内西瓜生产最严重的障碍，培育抗枯 萎病品种是解决这一问题的有效途径。西瓜枯萎病菌(凡一矗—“卿o，zmf．印．n沁mI 小种l占主导，但也不排除有其他两个生理小种或有别于这三个生理小种的其他的小种的 分化。野生西瓜材料P助634l是国际上目前公认的唯一一份抗枯萎病三个生理小种的抗 ◆ 源”I，将其抗性转育到西瓜栽培品种上，具有重大意义，但由于P1296341的农艺性状与品质 极差，传统的转育方法效率较低，分子标记技术的建立与发展为上述研究提供了一种新途 径。利用分子标记技术已找到了与许多抗病基因连锁的分子标记，并进行定位或图谱克隆， 感病材料京欣～号父本自交系97103为试材，利用随机扩增多态性DNA(Randolllmpli涮 加rphicDNA，RAPD)与简单重复序列(simple 中采用混合分组分析(buIkcd segregaⅡt 基因连锁的分子标记，为进一步开展西瓜抗枯萎病育种分子标记辅助选择，与抗病基因定位 与克隆打下良好基础。 1材料和方法 1．1供试材料 实验所用的野生西瓜(C缸m池fⅡM1w 。 送，代号为P129634l，该材料来源于非洲，在当地叫拈㈣a西瓜，其农艺性状较差，生长势 旺，甜度低，皮厚，耐贮运。普通西瓜(ci￡州￡Ⅲz口m跳var．缸n口觚?)材料为京欣父本 @国亲自然科学基金项目与北京市科技新星计划项目资助 426 由本组自繁。 1．2研究方法 1．2．1西瓜苗期抗枯萎病鉴定 西瓜枯萎病菌为尖孢镰刀菌(ns口r|cm o研印omm)西瓜专用型生理小种1，采自北京通 度调整到l×106个／“待用。接种方法为国际通用的浸根法【3】。接种在空调温室内进行， 温度保持在26／18℃。约一周后开始发病，每隔2d调查一次发病率及病情指数，病情分级标 准按M8ItyIlⅢ的标准进行分级，2级以下为抗病植株，3级以上为感病植株。接种存活的单 株，再进行切根灌菌液处理，以进一步鉴定其抗病性，灌根处理10一15d调查其死苗情况。 1．2．2西瓜DNA的提取 西瓜叶片DNA的提取采用快速简单DⅣA提取方法，参照许勇等【4]的方法。 1．2．3啪分析与产物的检浮4 25(L的反应体系中含有2．5皿加×bu踟(10mm】／I．删s—Ha，pH8．0，50Ⅲ彬L u Kcl，2．ol姐彬LMg吐)，2．O一2．5珊蒯／L脚，30ng引物，1TaqE。10llg模板DNA。 引物与栅购白上海生工公司，1铀D姒聚合酶购自北京泰克金公司。反应程序为预变性