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生物工程下游技术复习题 第一章 绪论 生物下游加工过程的几个阶段 预处理和固液分离, 提取（初步分离）, 精制（高度纯化）, 成品制作. 评价分离效果的重要参数:纯度，回收率，浓缩率。 第二章 发酵液预处理和固液分离 主要名词：凝聚、絮凝 凝聚：指在电解质作用下，由于胶粒之间双电层电排斥作用降低，电位下降，而使胶体体系不稳定的现象； 絮凝：指在某些高分子絮凝剂存在下，基于桥架作用，使胶粒形成较大絮凝团的过程。 1.改变发酵液过滤特性的方法 调酸（等电点），热处理，电解质处理，添加凝聚剂，添加表面活性物质，添加反应剂冷冻-解冻，添加助滤剂 2.发酵液的相对纯化 （1）高价无机离子的去除方法 （2）杂蛋白的去除方法 沉淀法，变性法，吸附法。 3常用的固液分离方法： 重力沉降，浮选，旋液分离，介质过滤，离心。 （1）离心 离心机种类：碟片式。管式。倾析式。 （2）过滤（澄清过滤，滤饼过滤） 过滤机种类：按推动力分为4种重力过滤，加压过滤，真空过滤，离心过滤。 板框压滤机，真空转鼓过滤机 第三章 细胞破碎和包涵体复性 细胞破碎的主要方法和适用对象，了解基本机理 方法：珠磨法原理：进入珠磨机的细胞悬浮液与极细的玻璃小珠、石英砂、氧化铝等研磨剂（直径小于1mm）一起快速搅拌或研磨，研磨剂、珠子与细胞之间的互相剪切、碰撞，使细胞破碎，释放出内含物。在珠液分离器的协助下，珠子被滞留在破碎室内，浆液流出从而实现连续操作。 高压匀浆法原理：利用高压使细胞悬浮液通过针形阀，由于突然减压和高速冲击撞击环使细胞破碎，细胞悬浮液自高压室针形阀喷出时，每秒速度高达几百米，高速喷出的浆液又射到静止的撞击环上，被迫改变方向从出口管流出。不适用范围：易造成堵塞的团状或丝状真菌， 较小的革兰氏阳性菌，含有包含体的基因工程菌（因包含体坚硬，易损伤匀浆阀） 珠磨法 固体剪切作用 可达较高破碎率，可较大规模操作，大分子目的产物易失活，浆液分离困难 高压匀浆法 液体剪切作用 可达较高破碎率，可大规模操作，不适合丝状菌和革兰氏阳性菌 超声破碎法 液体剪切作用 对酵母菌效果较差，破碎过程升温剧烈，不适合大规模操作 X-press法 固体剪切作用 破碎率高，活性保留率高，对冷冻敏感目的产物不适合 酶溶法 酶分解作用 具有高度专一性，条件温和，浆液易分离，溶酶价格高，通用性差 化学渗透法 改变细胞膜的渗透性 具一定选择性，浆液易分离，但释放率较低，通用性差 渗透压法 渗透压剧烈改变 破碎率较低，常与其他方法结合使用 冻结融化法 反复冻结-融化 破碎率较低，不适合对冷冻敏感目的产物 干燥法 改变细胞膜渗透性 条件变化剧烈，易引起大分子物质失活 第四章 沉淀法 1.蛋白质的表面特征 蛋白质组成 20种氨基酸构成的两性高分子电解质，包括疏水性氨基酸和亲水性氨基酸 蛋白质折叠趋势 疏水性氨基酸：向内部折叠的趋势 亲水性氨基酸：分布于蛋白质外表面的趋势 结果 在蛋白质三维结构中仍会有部分疏水性氨基酸残基暴露于表面，在蛋白质表面形成一定的疏水区 蛋白质表面由不均匀分布的荷电基团形成荷电区、亲水区和疏水区构成。 蛋白质的溶解行为是一个独特的性质，由其组成、构象以及分子周围的环境所决定。 一般而言，小分子蛋白质比起在化学上类似的大分子蛋白质更易溶解。 2.盐析法的原理和影响因素 防止蛋白质凝聚沉淀的屏障 ⑴蛋白质周围的水化层 可以使蛋白质形成稳定的胶体溶液。 ⑵蛋白质分子间静电排斥作用。（存在双电层） 盐析类型（Ks盐析、β盐析） 定义：蛋白质在高离子强度的溶液中溶解度降低、发生沉淀的现象称为“盐析”。 盐溶：低盐情况，盐离子强度的增高，蛋白质溶解度增大。 盐析：高盐，盐离子强度增加，蛋白质溶解度减小。 盐析法原理：形成离子对，部分中和了蛋白质的电性，排斥作用减弱而能相互靠拢，聚集起来。中性盐的亲水性比蛋白质大，使蛋白质脱去了水化膜，使其沉淀 ㏒ S= β－ ＫsＩ 式中S——蛋白质的溶解度，g/L; I－一离子强度等于 I=1/2∑mizi2; mi——离子 i的摩尔浓度； Zi——所带电荷； β——常数，与盐的种类无关，但与温度、pH和蛋白质种类有关; Ks——盐析常数，与温度和PH无关，但与蛋白质和盐的种类有关。 ⑴在一定的 pH值及温度条件下，改变盐的浓度（即离子强度）达到沉淀的目的，称为“Ｋs”分级盐析法。（Ks盐析：固定pH, 温度，改变盐浓度） ⑵在一定的离子强度下，改变溶液的pH值及温度，达到沉淀的目的，称为“β”分级盐析法。（β盐析：固定离子强度，改变pH及温度。） 3.有机溶剂沉淀的基本原理和影响因素 定义向水溶液中加入一定量亲水性的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出的分离纯化方法。 原理1）加入有机溶剂后，会使水溶液的介电