组织培养5543.docVIP

组 织 培 养 第一章 植物组织培养的概念和重要性 植物组织培养（plant tissue culture）： 在无菌的条件下，在人工培养基上培养离体植物组织(器官或细胞)，使其生长、分化形成完整植株的过程，简称组培。 组织培养的优点：可以在不受其他部分干扰的情况下研究被培养部分的生长和分化规律。 组织培养的特点：取材少，培养材料经济；人为控制培养条件不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；利于自动化管理。 细胞的全能性（totipotent）：植物体的每个细胞都携带有该物种的全部遗传信息，因而只要在适当的条件下，植物一切生活细胞都具有分化为一个完整植株的潜在能力，这就是细胞的全能性。这是细胞工程的理论基础。 第二章 组织培养的一般程序 完整植株─→器官（组织）消毒─→外植体─→诱导愈伤组织或直接分化不定芽（或胚状体）等─→继代增殖─→生根成苗─→练苗─→移栽 2．1 培养基的配制 2．1．1培养基的成份 大量元素、微量元素、有机物、植物生长调节物质、固化剂（琼脂）等。 无机盐类：由大量元素和微量元素组成。 大量元素(major element) ：C,H,O,N,P,K,Ca,Mg,S； 微量元素(minor element) ：Fe,B,Zn,Cu,Mn,Co，Mo 碳源和能源:常用蔗糖，作为碳源和能源，同时也可维持一定的渗透压。 维生素类：直接参与酶的形成以及蛋白质、脂肪的代谢 常用的有维生素VB1(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、VB9(叶酸)、烟酸、肌醇以及维生素C(抗坏血酸)等。 氨基酸有机附加物: 甘氨酸、椰子汁（ＣＭ）、酵母提取物（ＹＥ）、香蕉泥等。 植物生长调节物质(Plant growth regulator) （1）生长素类(auxin)：诱导细胞的分裂和根的分化。常用的有NAA, IBA , 2,4-D 。2，4-D常用于诱导愈伤组织；IBA、NAA常用于诱导生根。 （2）细胞分裂素类(cytokinin)：促进细胞分裂和由愈伤组织或器官上分化不定芽。常用有 6-BA 、ZT、 KT。 （3）赤霉素类:促进茎节伸长和胚状体发育，打破休眠。常用赤霉酸(GA3)，不耐高温，需要过滤灭菌后加入培养基。 注意:生长素/细胞分裂素的比例高,促进生根； 生长素/细胞分裂素的比例低,促进长芽。 固化剂： (1)常用琼脂： 由海藻得来的多糖类物质。一般用量为0.6～1.0％，有时可配成不加固化剂的液体培养基，进行液体浅层培养有如下优点：低成本、生长快、移栽成活率高等。 （2）结冷胶(gellan gum，英国人称为Gelrite) : 一般用量为0.05%。是美国kelco公司开发的新型微生物胞外多糖，它是由假单胞杆菌在中性条件下，经有氧发酵而产生的细胞外多糖胶质，是一种新型的全透明的凝胶剂。由四个糖分子依次为D-葡萄糖、D-葡萄糖醛酸、D-葡萄糖、L-鼠李糖通过糖苷键连接而成的高分子糖类化合物，其中第一个葡萄糖分子是以β-1，4糖苷键连接。 七/其它成分 1/活性炭：吸附剂,用量0.5~3%。 2/硝酸银：抑制乙烯活性,促进器官发生，克服玻璃化、克服早衰和落叶. 3/抗生素：防止内生菌、外植体杂菌污染。 2．1．2培养基的配制与灭菌 煮好培养基后用１Ｎ的氢氧化钠或１Ｎ的盐酸调pH至5.6～6.0，然后置于灭菌锅内，在温度121℃、压力为1.1kg/cm2的条件下灭菌15～２０分钟。 注意：培养基的状态（琼脂用量、 pH值、灭菌时间等均产生影响） 2．2 外植体(explant)的选择和培养 外植体：植物组织培养中用来进行离体无菌培养的材料，可以是器官、组织、细胞和原生质体。 外植体选择(根据器官分化能力)： 1/根、茎、叶、花、果等均可作为外植体，但器官分化能力有所不同(芽、叶分化能力强）； 2/植物不同部位的外植体、不同年龄的外植体，其器官分化能力也不相同（幼态组织较成年组织具有较高的形态发生能力）； 3/外植体大小不同，其器官分化能力也不同(外植体越大，其分化能力越强); 4/取材季节不同,其器官分化能力也不同； 5/基因型不同，器官分化能力也不同。 外植体消毒灭菌： 0.1%的升汞6-10分钟;2～5％的漂白粉(或次氯酸钠)５－20分钟;70%酒精数秒钟。具体浓度和灭菌时间视外植体情况而定，灭菌后用无菌水冲洗３～５遍。 外植体放置的方式：直插、斜插、倒插、横插 2．3 繁殖体的培养增殖 外植体经培养后可通过如下四种途径进行增殖： 1/芽体的增殖； 2/胚状体形成；.0 3/不定芽发育； 4/原球茎的发育。 2.3.1 芽体的增殖 离体芽经外源