剑尾鱼CK10-like与CCL4基因mRNA实时荧光定量RT-PCR方法的建立及其在正常组织中的分布研究.pdfVIP

20t 1年中国水产学会学术年会论文摘要集 RT-PCR方法的建立及其在正常组织中的分布研究 卞荣玲1,2，李凯彬1，刘春1，石存斌1，吴淑勤1 (1．中国水产科学研究院珠江水产研究所，广东广州510380；2．上海海洋大学水产与生命学院，上海201306) 摘要：根据剑尾鱼CKl0．1ike和CCL4基因序列，分别在保守区域设计并合成引物，从剑尾 鱼脾脏中提取总RNA逆转录合成eDNA，对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T．A克隆 Green 及测序鉴定，所得标准品质粒以10倍梯度进行稀释，采用SYBRII染料进行荧光定 量扩增，构建标准曲线并进行融解曲线分析。结果表明，两基因的标准品Ct值检测范围广， 构建的标准曲线相关系数r2都为0．999，溶解曲线显示特异性单峰，组内和组间相关系数都 小于2％，表明该检测方法特异性、重复性和稳定性良好。本实验建立了剑尾鱼CKl0．1ike mRNA在 和CCIA基因实时荧光定量PCR检测方法，并检测了剑尾鱼CKl0一like和CCL4 各组织中的分布情况，发现CKl0．1ike在肝、脾、脑、眼、肠中的表达水平较高，在后肾和 鳃中也有较高的表达，在胚胎、头肾和皮肤中有少量表达，CCL4在脾、鳃、脑、眼、头肾 中的表达量较高，在后肾和肝中也有较高的表达，在皮肤、肠和胚胎中有少量表达。CKl0．1ike 和CCL4基因在剑尾鱼相关免疫组中的有较高的表达量说明它们在鱼体免疫反应中起到一 定作用，暗示了它们在免疫系统中的重要功能。 关键词：剑尾鱼：CKl0．1ike和CCL4基因；组织分布；实时荧光定量PCR Establishmentofreal．timeforckl0．1ikeandccl4mrna pcr and ofthedistributionofckl0．1ikeandccl4in study laeller xlOlaoolaorus BIAN Kai．binl，LIUChunl，SHICun．binl，WU Rong．1in91，2，LI Shu—qinl (1．PearlRiverFisheriesResearchInstitute．Chinese AcademyofFishery 5 Scienceand Sciences，Guangzhou10380，China；2．CoHegeofAqua-life Ocean Technology,ShanghaiUniversity,Shanghai201306，Chha) Abstract：ASYBRGreenIIbasedreal．timePCRfor of heller quantitativeanalysisXiphophorus mRNAwas CKl0．1ikeandCCL4 RNAwasextractedfromthe of developed．Total spleen hellerthencDNAwas reverse was Xiphophorus