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可诱导裂解的Ecoli
JMl09(pTUl4)产PHB
摇瓶发酵条件的研究
于慧敏臧翼飞尹进李红旗沈忠耀
00084)
(清华大学化工系北京1
摘要 本文对新建可诱导裂解的基因工程茵Ecoli
JMl09(pTUl4)产聚一芦一羟基丁酸酯的
摇瓶发酵条件进行了研究，了解了谊茸在葡萄糖一无机盐培养基中的生长代谢规律，并优化得到了
最适培养基组成厦最优培养条件．在优化条件下，经过20h左右的培乔，茸体干量可从优化前的
1 039／L捉高到4．489／L，PHB占细胞干重的百分含量则从35．7馓高到88％．此外，本文还验证
了谊茵种的裂解效果并不因PHB的走量积累而受到影响．
关键词 可诱导裂解聚一芦一羟基丁酸酯摇瓶发酵条件优化
有很好的应用前景。它是原核生物体内碳源和能源的储存物质，是微生物在不平衡生长条件下
以颗粒状态贮存于细胞内的一种高分子聚合物…。
分离提取PItB时首先面临细胞破碎问题。发展生物方法破细胞壁，解决工程问题．可以简
化处理步骤和减少化学试剂的使用，大大降低PHB回收成本并减少环境污染口】。尹进在成功地
分离出九噬菌体裂解基因片段S-RRz的基础上，构建出PHB高表达且菌体细胞可诱导自动裂解破
coli
壁的新型重组苗E JMl09(pTUl4)。本文在摇瓶中对该菌的葡萄糖一无机盐培养基和培养条
件进行了优化，从而为该菌的高密度发酵培养及工业化应用创造条件。
l材料和方法
1．1菌株和质粒
重组菌Ec以JMl09(pTUl4)(Apr)为本所构建；质粒pTUl4的基因谱图如下所示：
1．2分析方法
菌体培养液浊度测定，采用分光光度法：PHB含
量定量测定，采用硫酸降解法，定性检测则用苏丹黑染
色法： 菌液中葡萄糖含量的测定，采用3，5一二硝基
水杨酸法： 菌液中氯化铵含量的测定，采用靛定酚蓝
比色法。
1．3试剂和培养基
1．3．1优化前培养基(g／L)葡萄糖2．0，酵母浸出
3．0，NaCI
粉I．0，Na2HP04·12H2015．1，KH2P04
图1 质粒pTUl4的基因谱图0．5，NH4CI1．0，CaCl2*2H20 O．25，
0．015，MgS04·7H20
1．3．2优化后培养基(几)
葡萄糖lO．09，酵母浸出粉2．09，Na2HPO‘·12H203．09，KH2Po,0．89，
3 150mg，TES
NH‘CI09，FeS04*7H202mg，CaCl2·2H205mg，MgSO,。7H203．0ml，Ap50rag
pH6．0；121C．20min灭菌。接种前加入CaCh溶液、MgSO,溶液、葡萄糖和氨苄溶液。
117
30，NaMoO,2H20
30，MnCl2_H20
1．3．3微量元素液／TES(脚g／L)C
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