抗药性昆虫细胞电生理研究.pdfVIP

篁 !里些三兰叁查垫主些重墨盒茎±旦兰垒堡塞』兰———一 抗药性昆虫的细胞电生理研究 贺秉军 刘安西 f南开大学生物系 天津30007I) 摘要害虫几乎对所有化学农药及Bt等生物都产生了抗性。离子通道是多种杀虫剂的作用靶，因此作为研 究离子通道基本手段的电压钳与膜片钳技术在害虫抗性检测与抗性机理研究中越来越受到重视。本文对害 虫抗性机理、杀虫剂作用机理、药物筛选及膜片钳技术等的结合应用进行了综述。 关键词： 电生理膜片钳害虫抗药性杀虫剂 昆虫抗药性的产生是对不利生存环境的一种适应，害虫具有对任何一种杀虫剂产生抗 性的潜能。随着杀虫剂用量的增多和杀虫剂种类的不断更替，交互抗性现象日益严重，多抗 性现象变得越来越普遍。 害虫抵抗杀虫剂和杀虫剂毒杀害虫的机理十分复杂。杀虫剂作用于昆虫要经过：侵入 体内、在体内组织中的分布、储存、代谢及最终作用于靶部位等过程；害虫抗药主要通过：行 为改变、表皮穿透性降低、代谢解毒能力增强和靶标敏感性降低等。由于杀虫剂多为神经 毒剂．因此细胞神经电生理技术在害虫抗性机理研究中越来越受到重视，与其他方法相结合 有助于阐明各类药剂的药理和毒理、药物结构与活性的关系及新药筛选等研究。 l电压钳技术应用于害虫抗药性研究 而成。其实质是通过负反馈微电流放大器在兴奋性细胞上外加电流，使膜电位稳定在指令 电压水平，以消除钠电导对膜电位的正反馈效应。这样，在膜电位突然跃变并固定于某一数 值时，可观察膜电流的变化。膜电流的改变反映了膜电阻和膜电导的变化，后者相当于膜通 透性的变化，而膜通透性与离子通道有关。因此电压钳技术也是研究离子通道的基本方法。 离子通道是多种天然毒素及合成杀虫剂的基本作用靶，因此该技术为害虫抗药性及药物作 用机理研究等提供了有力武器。 神经敏感性降低是害虫重要抗性机制之一。Ahmad等用双微电极电压钳法，对比分析 multiunit activity)，发现药物 了敏感与抗性棉铃虫外周神经纤维多单位自发活动(spotaneous 作用后，’二者的神经兴奋性时间明显不同，证实泰国棉铃虫存在神经不敏感抗性机制。 Gunning等发现澳大利亚棉铃虫存在超击倒抗性、穿透抗性和代谢抗性。农药使用策略调 艇后，该种昆虫对菊酯抗性的主导机制发生变化，但依然存在神经不敏感性。赵勇等和张友 军等发现我国棉铃虫亦存在神经不敏感抗性机制。烟夜蛾是美国棉田重要害虫，神经不敏 感性是其对拟除虫菊酯产生抗性的重要机制。Nicholson等对氰戊菊酯引起烟夜蛾自发微兴 奋性突触后电位(mEPSP)释放频率突然增加的临界浓度进行分析，发现敏感品系比抗性品系 要低10-50倍。据此认为田间种群存在较低的神经不敏感抗性。 利用电压钳技术不仅可直接检测害虫的神经不敏感性，同时可对其成因进行深入分 析。Pepper等通过测定家蝇mEPSP。发现超．kdr品系对氯氰菊酯的敏感性分别比Kdr和敏 感品系低300和10000倍，认为神经系统的kdr至少由两个位点不敏感区形成：～个与钠通 道不敏感有关，对于kdr与超．kdr品系对I、II型菊酯的抗性效能无差别；另一个与突触前 中国化工学会农药专业委员会第十届年叁垒文集—— 塑 膜相关，是超．kdr抗性品系对II型菊酯抗性的主要因素。后者可能与递质释放中的钙离子 晶系具更高抗性，但用苏云金杆菌毒素BTG502处理时．超一kdr并未显示出比敏感品系更 高的抗性，kdr对此的敏感性较超．kdr和敏感品系至少低100倍。这表明三个品系的电压依 赖性钠通道不相同。超．kdr所表现的比kdr更高抗性不能简单以更低的神经不敏感性来解 释，除钠通道外，其它靶标位点，如蛋白质磷酸化或钙离子调节也有关系。 2．膜片钳技术应用于害虫抗性研究 technique)是在电压钳基础上发展起来的一种新技术，可在很 膜片钳技术(patch．clamp 小膜面积上进行电压钳制，即可将细胞上一个通道的电位固定在一定水平，观察流过通道