阳离子脂质体禽流感病毒HA基因重组质粒复合物电镜研究.pdfVIP

电子显微学报J．Chin．Electr．Microsc．Soc 17(4){353～3541998年 353 阳离子脂质体禽流感病毒HA基因重组质粒 复合物的电镜研究 陈吉祥 李广林 薛飞群 赵青云 赵荣材 (中国农科院兰州畜牧与兽药研究所，兰州730050) 赵家政李树本 (中国科学院兰州化学物理研究所，兰州730000) 阳离子脂质体已被成功地用于重组质粒在体内外的基因转移，尤其在基因治疗和基因免疫 中显示出较好的应用前景，而有关阳离子脂质体介导基因转染的生理生化机制研究才刚刚开 始口。，已知阳离子脂质体与重组质粒形成的复合物对转染是否成功有关键的作用，而且不同阳离 子成份组成的脂质体与质粒形成的复合物性质不同，各种技术如荧光偏振，核磁共振、X一射线衍 射、琼脂糖电泳等都应用于阳离子脂质体质粒DNA复合物研究，而电镜技术在研究阳离子脂质 体DNA复合物的结构、大小等性质方面有不可替代的作用。本文用透射电镜技术研究了DC— 材料与方法 阳离子脂质体的制备：3p一(N一(N 流感病毒HA重组质粒pSVH7按文献制备o]。 水漂洗，干燥后于JEM1200EX／S型透射电镜下，80kV电压观察。 结果与讨论 超声波处理的阳离子脂质体未与质粒DNA结合之前为均匀的小单层脂质体，粒径大小范 成复合物后，发生了显著变化，主要表现在：(1)脂质体粒径变大，脂质体pSVH7复合物的粒径 形态多样化，不规则脂质体增多，有椭圆形、棒状结构的脂质体(图2)；(3)可观察到脂质体的聚 集及膜融合现象；(4)脂质体结构变化，出现了多层结构脂质体(图3)。 已知阳离子脂质体与质粒DNA的磷酸根之间电荷作用是形成复合物的主要动力，质粒 DNA吸附到阳离子脂质体表面后，引起脂质体的聚集及脂质体膜融合，从而使脂质体粒径变大， 面，我们认为除了质粒DNA吸附于脂质体外部之外，由于膜的融合有可能使部分DNA分子进 DNA与阳离子形成复合物的大小与二者的离子强度及电荷平衡有很大关系，在比例较低时， 电子显微学报JChin．Electr．Microsc-Soc． 1998年 17(4)t353～354 354 眼可见沉淀，复合物的粒径可达5pm，而且出现多形性结构·我们的观察也证实了这点。