中蜂囊状幼虫病毒的纯化、结晶和结构研究.pdfVIP

电子显微学报J．Chin．Electr．Microsc，Soe 17(4)：387～3881998年 387 中蜂囊状幼虫病毒的纯化、结晶与结构研究” 冯建勋卢火斤英张勤奋 马泽微张景强 黄文忠。 张学峰+ (中山大学昆虫研究所生物防治国家重点实验室，广州510275) (。广东省昆虫研究所蜜蜂组，广州510260) 中蜂囊状幼虫病是中峰生产中一种严重的病毒病害，尤其在东南亚一带几乎形成灾难性病 ScabroodVirus 的病毒所引起，定名为中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(Chinese 交叉感染性，且具不同的抗原性“。]。 与蛋白质的相互作用，需对CSBV进行纯化，制备高浓度，高纯度的CSBV，并进一步长成晶体， 最后为以后研究需要测量衣壳各蛋白的分子量。 材料与方法 一、病毒的纯化与电镜观测 患病幼虫取自广东省昆虫所养峰场。患病幼虫与等量pH7．6的PSB先混匀，用研钵磨碎。加 min离心1h，弃去上清，用PBS洗脱沉淀，重复两次差速离心，可得足够浓度和高纯度的病毒。 负染在JEM—IOOCX／Ⅱ电镜中观察。 二、病毒的结晶 大，而乳白色病毒悬液变得清彻透明。 三、病毒的SDS—PAGE 产品。 结果与讨论 一、病毒纯化和电镜观察 由于病毒粒子被脂肪体所包涵，故必须溶去脂肪体释放出病毒，在室 温条件下脂肪体不易溶于氯仿，我们曾使用脱氧胆酸钠、高锰酸钾和SDS，虽然病毒粒子易被释 放，但对病毒粒子有损伤：出现空病毒，会溶掉病毒。在37—40℃水浴则温和得多。图1显示纯化 后病毒，绝大多数是完整的且不含有杂质。由于病毒悬液含有脂肪，点样时，如果支持未经亲水处 *国家自然科学基金重点项目资助 电子显微学报J．Chin．Electr．Mlcrosc．Soc 388 17(4){387～8881998年 理，点样会失败，在电镜中看不到病毒。支持膜经亲水性处理后，问题就解决。从图1中可见 CSBV粒子直径大约26rim，呈球状，粒子带有一个圆形“白帽”，直径大小不一。 二、病毒晶体呈菱形结构的片状晶体，经常生长成直径几mm，厚度约1ram的大块晶体。在发生 振荡后，晶体会被溶解，静置一段时间后又会再生长晶体出来。 子量为44．2KD，这个在文献中未见有报导。我们从两批原材料中纯化的病毒均有相同结果，并 且分子量较大不可能是因蛋白质降解所产生。这对现象有必要继续深入研究。 参考文献 8． [1]董秉义等．中蜂囊状幼虫病病毒的研究．中国养蜂，1984，3 7． [2]杨冠煌等．中蜂囊状幼虫病病原鉴定．中国养蜂，1979，8：1 Es3SambrookJeta1．Molecular Manual．2nded．Cold Harbor Cloning，ALaboratory Spring LaboratoryPress， 1989． [4]杨荣鉴等．中蜂囊状幼虫病病毒核酸和多肽的研究．病毒学杂志．1988，1：54． 图1纯化后的CSBV的电镜照片 图2 CSBV的SDS—PAGEM：标准蛋白，S：样品 中蜂囊状幼虫病毒的纯化、结晶与结构 研究 作者： 冯建勋， 张勤奋 作者单位： 冯建勋(大学昆虫研究所生物防治国家重点实验室(广州))， 张勤奋(省昆虫研究所蜜蜂组(广州)) 本文读者也读过(10条) 1. 柳刚.胡福良 蜜蜂瓦螨病毒病[期刊论文]-中国蜂业2006,57(12) 2. 周婷.姚军.兰文升.温建新.王强 蜜蜂KBV和APV病毒RT-PCR检测技术研究 [期刊论文]-畜牧兽医学报2004,35(4) 3. 马鸣潇.曲祖乙.王术德 蜂病毒研究进展[期刊论文]-辽宁医学院学报 2008,29(5) 4. 张勤奋.杨艺峰.梁玉尧.卢炘英.张景强 中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)核酸 的结构研究[期刊论文]-电子显微学报2002,