TGFβRⅡ-siRNA表达质粒构建及干扰效应鉴定.pdfVIP

·论著· TGFl3RII—siRNA表达质粒构建及 干扰效应鉴定 付荣泉谭德明 丁继光吴金国 洪亮孙庆丰 【摘要】 目的通过构建转化生长因子13II型受体小于扰RNA(TGFpRII—siRNA)的表达质粒， 根据 观察其在肝星状细胞中对TGFBRII的表达抑制效果，为研究其阻断肝纤维化作准备。方法 Ambion公司网上设计软件设计二个siRNA作用靶点，体外合成的相应双链DNA被插入pSilenc er2．1．U6质粒中，以脂质体Metafectene2000转染HSC-T6细胞，利用RT—PCR法和western-blot分别 检测对TGFBRII mRNA表达分别下调到0．89±0．06和0．25± 二个质粒是成功构建；与对照组相比，其对TGFBRII 0．03，对TGFBRII蛋白表达分别下调到0．86±0．05和0．23±0．02，转染siRNA—b质粒组显著抑制 mRNA和蛋白表达(均P0．01)，siRNA-a质粒组无统计学意义(均P0．05)。结论 TGFBRII TGFpRII．siRNA能明显抑制TGFBRII的表达