微渗析技术--流动注射电化学检测联用测定药物--蛋白相互作用地研究.pdfVIP

电分析化学进展·1999 F7 微渗析技术一流动注射电化学检测联用测定 药物一蛋白相互作用的研究 施国跃徐芳屠惠萍金利通 (华东师范大学化学与生命科学学院上海 200062) 药物在进人人体血浆后，会与蛋白质如人血清白蛋白、n-一酸性糖蛋白等存在不同程度的 结台，这是一快速可逆过程，可很快达到平衡状态n。2]。而游离药物的浓度对一些药物特性如 肝代谢速率、肾排泄速率、生物膜渗透率和稳态分析体积等都有重要的意义。目前，已有多种方 法用于药物一蛋白质结合的研究，如平街透析、超滤、前沿色谱法等口]。本文以馓渗析取样技术 与流动注射一电化学检测相结合，测定了硫酸链霉素与牛血清白蛋白的相互作用。Ni—Ti合金 硫酸链霉素在1．O×10_‘～1．O×10。H101．L“范围内呈良好的线性，检测限为8×10。 m1．L_。，线性相关系数为O．9991；利用徽渗析管对蛋白质的排斥作用，浏得硫酸链霉索与蛋 白质的结合常数及结合因子分别为5．45×103(m01．L“)“和1．21，为药物一蛋白质药物动力 学的研究提供了一种方便、快速、灵敏的分析手段。 白溶液，配制不同浓度比的硫酸链莓素一牛血清白蛋白的混台溶液(40；100，60：100，80： 化学检测法测定未结合的硫酸链霉索的浓度，计算硫酸链霉素与蛋白质的结台率、结台常数及 结合因子。 Ni-T．台金电极对硫鞋键霉素的催化作用将经预处理后的Ni—Ti合金电极置于 中右一对氧化还原峰，这是因为合金电极表面上Ni在NaOH溶液中形成了Ni(OH)。，而 的相互转换。 在10ml 应于+0．53V处的氧化峰峰电流升高．见图1(b)。催化机理如下： Ni(OH)：+OH一一Ni00H+H±O+e NiOoH+硫酸链霉素一Ni(OH)z+中间产物 中间产物一ne一产物 I。“Na0H 硫酸链霉素的墁性范围及检测跟 以Ni—Ti台金电极为工作电极，以o．1molt 28．05+10．27X，重复测定6次，相对标准偏差3．1％。 ·349· 电分析化学进展·999 牛血清白蛋白与硫酸链霉素的结合率、结合常数、 结合因子按实验过程配制各浓度比的混台溶液，恒温 37℃，以1．O脚．min“为灌流速率，流动注射一电化学检 测条件如下，测定结合率如表～。 表l牛血清白蛋白与硫戤链霉素的结台率 t 浓度比(蛐01．L。1来结合的砬 结合的硫酸 m01．L一1) 酸链霉素难 结舍率 链毒素浓度 硫酸链霉索；牛血清 度(mol- (％) (Hm01．L‘) 白蛋白 I．1) 40，100 25．3 l4．7 36．8 601100 39．6 20．4 34．0 80：100 53．0 27．0 33．8 100：100 67．4 32．6 32．6 根据方程：T／fuw=一k7一nk可求得结合常数及结 E／VvB．Ag／AgCl 合因子。 7——缮合的药物与蛋白质的物质的量浓度之比， l cV ofst唧I咖ydn F‘gure g件ph ekdtO“xldaU耐I试伯Hi-TlnectrOde cUw——未结合的药物的浓度k——结合常数。n—