胃癌腹膜亚临床转移相关标志物检测和临床意义的研究.pdfVIP

胃癌腹膜亚临床转移相关标志物 检测及临床意义的研究 徐惠绵王振宁王剑峰严哲弦张建军吴涛 中国医科大学第一临床学院肿瘤科 【摘要】目的探讨胃癌腹腔冲洗液中与肿瘤相关的分子生物学标志物检测，对预测 腹膜亚临床转移的临床意义。方法采集60例胃癌、10侧良性胃病交手术中腹腔冲洗液标 本。常规细胞学检查，同时采用RT—PCR方法检测腹腔冲洗液中CEAmRNA表达及阳性 LASA方法检测白细胞介素一8(IL一8)含量(u∥m1)。比较与原发胃癌浸润深度、浆膜受 侵(S+)及类型、腹腔脱落癌细胞(ECC)及肉眼腹膜转移(P+)的相关性。结果① (P0．05)。ECC(+)病例 CEAmRNA阳性率(56．3％)明显高于ECC(33，O％) 深度增加。Ps因素及浆膜类型不同CEAmRNA阳性级别差异显著。②Coil．Ⅳ、LN、IL一 (一)的5例中，Ⅳ型胶原和IL一8水平亦显著升高。结论胃癌腹腔冲洗液中上述标志物 的检测，均有助于腹膜亚临床转移的早诊或预测。 【关键词】 胃癌腹膜亚临床转移腹腔冲洗液肿瘤标志物 胃癌是我国人群中发病率和死亡率均占第一位的恶性肿瘤。在目前住院病例中，90％以 上为中晚期，即使施行根治手术，5年生存率仅为30％左右，其中40％～54％死于腹膜转 移复发…。因此，在腹膜转移的亚临床阶段做出正确诊断或预测，采取有效的防治措施， 对提高生存率具有重要意义。本研究采用免疫和分子生物学技术检测胃癌腹膜转移早期阶段 与癌侵袭转移相关的分子标志物，通过与腹膜转移相关病理因素比较，确立一组相对敏感、 特异的方法和指标。以指导腹膜转移的防治。 一、材料与方法 1．研究对象殛临床病理资料 病例来源于1998年3月，1999年4月中国医科大学第一l临床学院肿瘤科胃癌手术病例 60例，另收集10例胃良性病变标本为阴性对照，MNK74和HSC39胃癌细胞系作阳性对 照。与腹膜转移相关的病理资料包括：胃癌原发病灶的浸润深度、浆膜类型及腹腔脱落癌细 胞(ECC)结果。Ps因素按日本胃癌病理规约标准，即P(+)肉眼腹膜转移；S(+)显 196 微镜下浆膜受侵。 2．实验方法 管，注入生理盐水100ml，轻轻搅动后吸出50 ml，如已有腹水者直接吸出，Eppendoff试管 分装，离心沉渣涂片、HE染色、细胞学检查。取上清0．2 ml，放射免疫法检测CEA蛋白 其余冲洗液一80℃保存待测。 (2)CEAmRNA RT—PCR检测。选取未混有大量红细胞的冲洗液标本43例，每例取标 本1．0 Man．Co．)， RT—PCR扩增方法按说明书进行。扩增产物经琼脂电泳显示131 Bp条带，即为阳性。再将 所得的条带与细胞系阳性标准比较，确定相对阳性级别。100％．75％之间为++++。 75％一50％为+++，50％一25％为++，25％以下为+。 ml 加入标准抗原，室温下水浴18 h，形成抗原抗体复合物后，再加入125I—C011．Ⅳ、”51一LN 100m，水浴30分，离心弃上清，微电脑7计数仪测定放射性计数(ng／m1)。 及标本各20pl；除空白孔外，每孔再加入稀释的生物紊化抗体100出，室温孵育2小时，加 洗涤液350／xl，30秒后甩净，共洗涤4次；每孔再加入稀释的酶结合物100m，振荡混匀 后，室温孵育30分钟，再加入底物A、B各一滴，避光室温显色，450nm处读数 (ug／m1)。 3．统计学分析 定量采用SAS软件行t检验。 二、结果 1．a弘mm忱检测结果与P一哑A、EOC比较 显著(P0．05)(见表1)。