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2一酮基-L-古龙酸酶法合成的研究 山东大学微生物技术国家重点实验室 吉爱国 高培基 ife．sdu．edu．cn Tel(0531)8564429，Fax：(0531)8565234，E-mailgaopj日l 维生素C是临床上应用广泛的重要医药产品。主要用于治疗由于维生素c缺乏所造成的各类疾病．在 食品、饮料、饲料、化妆品等方面也有广泛用途。由于维生素c具有良好的抗氧化功能，在冶金、摄影等 方面的用途也目渐扩大。维生素C已成为目前维生素类中产销量最大、用途最广的品种。 1 995年底以来，由于国际市场的变化，我国维生素c的生产和销售遇到了前所未有的困难，这不是 由于维生素C实用价值降低造成的，而是由于激烈的市场竞争引起的。维生素C的价格之争更加说明维生 素c是一种极具市场潜力的重要产品。2一酮基-L-古龙酸是维生素C的直接前体．目前，2一酮基一L一古龙酸 的工业生产主要采用莱氏法和两步发酵法。 莱氏法：D-葡萄糖经高压催化加氢制成D一山梨醇，然后用黑醋酸菌生物氧化制成L一山梨糖，经丙 接用盐酸转化成维生素C，或者先制成2一酮基一L一古龙酸甲酯，再用碳酸氢钠转化为维生素c。该法缺点 是生产工序多，过程长，难以连续化操作，劳动强度大，需要耗费有毒和易燃的化学品，对环境污染严重。 二步发酵法： 二步发酵法是我国于70年代初研究开发成功的专利技术，是我国目前采用的主要方 法。 此法将莱氏法中的丙酮化和化学氧化两步反应改为一步假单胞菌生物氧化(实际上是两种菌，即大小菌 协同作用)，革除了大量的有机溶媒和化学试剂，降低了成本，改善了劳动条件，减少了环境污染．但仍 需以D一山梨醇为底物，且发酵过程包括两步三菌，操作工艺繁杂，易受污染，转化率低于莱氏法．1986 年瑞士罗氏(Roche)公司以550万美元购买了我国的两步发酵法专利技术，采用新技术、新设备使vc的 5％，1 总收率达6 00L罐规模的Vc总收率达70％． 上述的莱琵法和两步发酵法都是经D一山梨醇合成Vc．D一山梨醇是由葡萄糖经高压催化加氢制备， 反应条件苛刻，耗能高，不安全．如能直接从葡萄糖发酵生产，就可避免这些问题．目前，国内外都在积 极研究的串联发酵法和基因工程菌一步发酵法就是这样考虑的． 物合成2-KLG的途径至少有六条． 1一nc Figure production pathwa2^of2-keto--L-gulonate fiom百u∞∞ 89 途径。沿这一途径合成2-KLG理论上最先避，实用中最经济简便．可以由葡萄糖经葡萄糖酸、2一酮基葡萄 技术问题，如生产周期长，第一步发酵的产物2．5-DKG不稳定，需经化学自：灭菌、低温存放等一系列操作， 然后进入第二级发酵，转化率轻低。一步发酵法国外虽已申请专利，但转化率比串联发酵法还要低很多。 这两种方法距工业应用都还有较大距离。 II)酶法再生系统及此再生系统--5氧化葡萄糖酸杆菌 (2，5-DKGR)构成的辅酶II(Coenzyme11，co 9 (ffduconobacferoxydans，ATCC93；’j休止细胞偶联构成的2-KLG酶促合成体系．反应过程如图2所示。 The of c s of 8cidwithCo1I Fig，2 prtncipleenzymatisynthesi2-keto—L—gulonic 围2． 包含辅酶II酶法再生的2一酮基-L-古龙酸酶d：合成体系示意图 依赖于NADP的葡萄糖脱氢酶(E(11．【．I．47)将葡萄糖氧化为葡萄糖酸内酯并进一步水解为葡萄糖酸， 氧化为NADP。这种2一酮基一L一古龙酸酶法合成系统和在一种产物的连续转化过程中实现辅酶Ⅱ酶法再生的 方式在国内外均未见报道。 是利用