酵母提取物诱导重组大肠杆菌合成HrpNEcc 蛋白的研究.pdfVIP

中国农业科学 2009,42(11):3880-3887 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.11.015 酵母提取物诱导重组大肠杆菌合成HrpNEcc蛋白的研究 1,2 1 1 2 1 1,2 张 姝 ，王 敏 ，韩梅琳 ，陈 强 ，马荣才 ，高俊莲 1 2 （北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心，北京 100097 ； 四川农业大学资源与环境学院微生物学系，四川雅安 6250 14 ） 摘要：【目的】HrpNEcc蛋白是一种起细胞信号作用的蛋白激发子，通过激活植物遗传系统的多基因表达调控， 诱导植物的广谱抗病性、驱虫性和抗逆性，促进植物生长发育，因此在农业生产中具有重要意义。在 hrpNEcc 重 组大肠杆菌高密度发酵廉价诱导剂的筛选工作中，偶然发现不添加任何外源诱导剂的 TB 培养基对照处理也有 HrpNEcc 蛋白合成。本研究旨在找出引起对照处理中 HrpNEcc 蛋白合成的诱导因子，并研究诱导因子的来源和含 量对HrpNEcc 蛋白合成的影响。【方法】摇瓶发酵培养重组大肠杆菌，离心收集菌体，用考马斯亮蓝染色法测定菌 体总蛋白，SDS检测目的蛋白条带，并结合Bandscan 软件计算出HrpNEcc蛋白含量。【结果】在不添加任何 外源诱导剂的情况下，用TB 培养基发酵生产重组大肠杆菌 E. coli BL21(DE3)/pET30a(+)hrpNEcc，HrpNEcc蛋白 最高产量可达301.45 mg·L-1 ，比在IPTG诱导下，用LB培养基发酵生产的HrpNEcc蛋白产量提高72.43%。进一步 研究证实，TB 培养基中的酵母提取物（yeast extract）含有某些诱导因子能够诱导 hrpNEcc基因表达合成HrpNEcc 蛋白，并且 hrpNEcc的表达水平随酵母提取物来源和浓度的不同而存在较大差异。【结论】在不添加任何外源诱导 剂的情况下，高含量的酵母提取物诱导重组大肠杆菌 hrpNEcc 表达合成 HrpNEcc 蛋白，但其诱导机制还有待进一 步研究。 关键词：诱导；hrpNEcc；蛋白合成；生物农药 Study on Synthesis of HrpNEcc Protein in Recombinant Escherichia coli Induced by Yeast Extract 1,2 1 1 2 1 1,2 ZHANG Shu , WANG Min , HAN Mei-lin , CHEN Qiang , MA Rong-cai , GAO Jun-lian 1 2 ( Beijing Agro-Biotechnology Research Centre, Beijing Academy of Agriculture and Forestry, Beijing 100097 ; Department of Microbiology, College of Resources and Environment Science, Sichuan Agricultural University, Ya′an 625014, Sichuan) Abstract: 【Objective 】