氯化钴对人的e NOS基因启动子S P1改构体转录活性的影响.pdfVIP

第３５卷 第２期 暨南大学学报（自然科学与医学版） Ｖｏｌ．３５　Ｎｏ．２ ２０１４年４月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ＆ＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ａｐｒ．　２０１４ 　 氯化钴对人的ｅＮＯＳ基因启动子 ＳＰ１改构体转录活性的影响 杨云华，　樊振华，　邢飞跃 （暨南大学 生命科学技术学院免疫生物学系，广东 广州５１０６３２） ［摘　要］　目的：构建改造的人血管内皮细胞一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）基因启动子，利用氯化钴诱导的人脐静脉血 管内皮细胞１２缺氧模型研究其基因启动子活性的变化．方法：用不同剂量的氯化钴体外处理细胞复制缺氧模型， ＰＣＲ点突变技术构建突变启动子ｐＧＬ２ｅＮＯＳｉｎｓＳＰ１，分别将ｐＧＬ２ｅＮＯＳｉｎｓＳＰ１和ｐＧＬ２ｅＮＯＳｐ载体导入ＨＵＶＥＣ １２细胞，双荧光素酶报告基因技术用于检测启动子转录活性的变化．结果：ＤＮＡ测序显示人的ｅＮＯＳ基因启动子 ＳＰ１改构体的序列正确；改构体ｅＮＯＳ启动子活性在一定范围内随氯化钴刺激剂量的增加而升高．结论：ＳＰ１插入改 造的方法显著提高了ｅＮＯＳ基因启动子的转录活性． ［关键词］　ＨＵＶＥＣ１２细胞；　氯化钴；　一氧化氮合成酶；　ＳＰ１ ［中图分类号］　Ｒ３９２．１１；Ｒ３９２．１２　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１０００－９９６５（２０１４）０２－０１２４－０６ Ｅｆｆｅｃｔｏｆｃｏｂａｌｔｏｕｓｃｈｌｏｒｉｄｅｏｎｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ ＳＰ１ｍｏｄｉｆｉｅｄｈｕｍａｎｅＮＯＳｐｒｏｍｏｔｅｒ ＹＡＮＧＹｕｎｈｕａ，　ＦＡＮＺｈｅｎｈｕａ，　ＸＩＮＧＦｅｉｙｕｅ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＩｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＪｉｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６３２，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ａｉｍ：ＴｈｅｓｔｕｄｙｉｓｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｈｅｍｏｄｉｆｉｅｄｐｒｏｍｏｔｅｒｏｆｅＮＯＳａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｉｔｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｖｉａａｈｙｐｏｘｉａｍｏｄｅｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙｃｏｂａｌｔｏｕｓｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＣｏＣｌ）ｉｎｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｄｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎ ２ ｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ（ＨＵＶＥＣ１２）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＨＵＶＥＣ１２ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｓｏｆＣｏＣｌ ２ ｔｈａｔｉｓｋｎｏｗｎｔｏｍｉｍｉｃｈｙｐｏｘｉａ；ｔｈｅｐＧＬ２ｅＮＯＳｉｎｓＳＰ１ｖｅｃｔｏｒｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｂｙｓｉｔｅｄｉｒｅｃｔｍｕｔａｇｅｎｅ ｓｉｓ，ｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｐＧＬ２ｅＮＯＳｉｎｓＳＰ１ｖｅｃｔｏｒａｎｄｎｏｒｍａｌｐＧＬ２ｅＮＯＳｐｖｅｃｔｏｒ，ｒｅｓｐｅｃ ｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙａｄｏｕｂｌｅｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｒｅｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅｓｙｓｔｅｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ： ＴｈｅＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅＳｐ１ｍｏｄｉｆｉｅｄｐｒｏｍｏｔｅｒｐＧＬ２ｅＮＯＳｉｎｓＳＰ１ｗａｓｓｕｃ ｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓ