绵羊外周血中游离DNA提取及SRY基因检测.pdfVIP

新疆农业科学 2014，51(7)：1342—1346 XinjiangAgriculturalSciences doi：10．6048／j．issn．1001—4330．2014．07．024 绵羊外周血中游离DNA提取及 SRY基因检测 蒋立斌 ，张云生 ，杨 华 ，杨永林 ，石国庆 ，冯训勇 ，朱飞飞 (1．石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000；2．新疆兵团绵羊繁育生物技术重点室验室，新疆石河子 832000； 3。裕民县巴什拜羊繁育中心，新疆裕民834800) 摘 要：【目的】外周血中游离的DNA主要是指存在于血浆／血清等循环系统里的一些小片段DNA，应用在一 些疾病的诊断以及非创伤性产前诊断方面。研究三种方法从绵羊外周血浆／血清中分离提取游离DNA，建立 高效的外周血游离 DNA提取方法，并对 SRY基因进行 PCR扩增。 【方法】利用加热法、酚氯仿法以及试剂盒 法对500p．L血浆／血清中游离的DNA进行提取。根据游离 DNA片段大小的特点分别设计扩增产物大小为 168bp的检测引物和 178bp的SRY基因引物进行普通 PCR检测。 【结果】利用加热法、酚氯仿法、试剂盒法 都提取到了游离的DNA，PCR后通过琼脂糖凝胶电泳检测到了168bp的目的片段。同时利用 PCR扩增到了 178bp的SRY基因目的片段。 【结论】不同的提取方法均可有效提取分离绵羊外周血血清和血浆 中游离的 DNA片段，能够用于 SRY基因的检测。 关键词：绵羊汐 周血游离DNA；SRY 中图分类号：$826．1 文献标识码：A 文章编号：1001—4330(2014)07—1342—05 ExtractingFreeDNA inSheepPeripheralBloodandSRY Detection JIANG Li—bin ‘，ZHANG Yun—sheng ，YANG Hua ，rANGYong—lin ， SHIGuo—qing’，FENG Xun—yong ，ZHU Fei—fei (1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，ShiheziUniversity，ShiheziXinjiang832000，China；2．Key LaboratoryofSheepBreedingBioteehnologyofXPCC，ShihezhiXinjiang，832000，China；3．Reproductionand BreedingCentreofBashibaiSheepofruniingCounty，runiingXinjiang834800，China) Abstract：【objective】FreeDNAofperipheralbloodmainlyreferstosomesmallfragmentDNAwhich existsinplasmaandserum．Ithasagreatapplicationprospectsinthediagnosisofsomediseasesandnoninva— siveprenataldiagnosis．【Method】ThepurposeofthisstudyistoestablishanefficientfreeDNAextraction protocolfrom peripheralbloodofsheepbyhtreemethods．ThentheSRY geneislikelytobedetectedbyPCR amplification．ThefreeDNA ofplasmaandserum wasextractedwiththeheatingmehtod，phenolchloroform methodandkit．AccordingtothecharacteristicsofthefreeDNA，wedesignedsuitableprimers，whoseampli- ficationproductsizewas168bpand178bprespectively．【Result】ThefreeDNAwereextractedbyhtree mehtodsandtherewere168bpband detectedbygar