海绵共生微生物多样性地研究方法.pdfVIP

海绵共生微生物多样性的研究方法 李德海，朱天骄。，顾谦群，崔承彬 (孛善海洋大学海洋药物专食瑟磅究所出东青惫266003) 摘要海绵蔻海洋活幢耪震的装大来源，研究表磺，海蒜中魏活性物潢很多燕由与其共垒蓊徽斑物 产生的，对海绵共生微生物的研究，已引起人们的关注。本文综述了近年来海绵共生微生物多样性研究的 方法，劳对磺究孛存农魏阂题进蠢了搽每聿。 关键词海绵；微生物；辨生；生物多样性 海绵系多藐动物门生物，建动物弊中最藏单的多缁脆存在形式Hj。垒毽赛的海绵大约鸯5000多稀，获南搬到l￡极瓣多 鬈结擒薪颖，具有抗哮嚷、抗溃疡、抗感染、撬疟、抗真萤、驱虫、鱼毒性、酶掷铡鹅、免疫增强、编瞧毒及抗病毒等爱种生物活性 的化合物【3J，海绵已成为海洋活性物质的最大来源。近簪来发现许多从海绵中得烈的活性化合物是内共生于其中的徽=童物 产生或参与产生的【4J，因此海绵共生微生物是一个潜在的巨大资源，引起了科学界的广泛兴趣。 共附燕微生耪对于海绵熊有重要静作震，童婺集审在瑷下凡煮：①营养作焉：共萋||生手海缡孛鹩微生穆逶避我落豫耀秀 海绵提供黼养物质，主要是碳水化合物和含氮化合物【5-7J。②防御作用：从海绵中得到的微生物可以产生很多生物活性物 爱，包括抗生素，拒食物质，摅污援物质等￡s-12J。这表明海绵共附生微生物对其宿燕的生存鞠生长具有重要的意义，网对也 髭示了开发利用共附生微生物的广阔前景。 i海绵中微生物多样性的研究方法 甄谓生物多样性，是指在～个几斑群落中，众多不同类型生物的变化及它们之间的相对半度。海绵是滤食性动物，海绵 中质层中微生物的禽量高达30％一60％，其中肖相当一部分是共生于海绵细胞内舞的潍j。 1987年之前，对生态系统中微生物群体的彩样性及群落结构的分析太多是将微生物进彳彳分离培养，然后通过一般的生 瑗生讫反应或者特定的表型寒分析，竣是使愿鞭薹残RestrictionfraOl艴nt§硼痨—弦唆魁冁)嚣方法。这辩静方法的局限燃是盛 须先对微生物进行分离培养。由于绝大多数共生微生物难以分离培养，因此用常规的方法不能全面准确地评估其中微生物 辩体的多榉性L13J。 早期的电子显微镜技术必能从形态上观察潮海绵巾共生徽熊耪的存在耨不撩进行斡耩确定。逐年来随着16SrDNA序 Insitu 列分析和荧光原位杂交(Fluorescence 受全瑟懿掰究手段￡辩j。 1．1 16S rDNA序列问源性分析 16S rRNA在宝物进纯中其有高度的保守僚，在鼬多亿年垒物的进诧爷铅保持着原始酌状态，被孀予探索鸯吉至今豹进 化历程，通过16SrRNA基因序列的比对可以了解不同物种之间的亲缘关系。因此可以应用PCR技术特异的扩增微生物16S riga静基嚣帮16SrDNA，然震进行DNA痔烈阂源性分辑，从瑟雅定微生物在系统进亿树书鼹位置[15J。蟊翦蓬凌静多采用 odorabile中的细菌进行了研究。用细菌特异性引物519f5’一 这种方法进行生物多样性的研究，Webster等对海绵Rhopaloeides 蘩金磺露：溺家高技术研究发褒诲麓(S63it麓)青年慕金资蘸课簇(2002AA628130) *通讯作者：E—mflil：dlutj@oue．edll．m ·1178· 第一届海洋生物黼技术论坛论文集 im {lql i．黼端皇===昌鼍譬尝《====高=±茹##掌 浙有痔列结暴都不同警已知豹耪￡弼。 一m-- 鳓黑詈嚣8～ }0々qw“qd—f蝻 圈l海绵R．odorabih．中微生物的辐射状进化树。 the