苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti) 的耐酸性研究.pdfVIP

维普资讯 第 30卷第 1期 西 南 大 学 学 报 (自然科学版) 2008年 1月 Vo1．30 NO．1 JournalofSouthwestUniversity(NaturalScienceEdition) Jan． 2008 文章编号 ：1673—9868(2008)O1—0091一O7 苜蓿 中华根瘤菌 (Sinorhizobiummeliloti) 的耐酸性研究 张学军， 张 磊 ， 张 琴 ， 石 杰， 曹 良元， 代先祝 ， 魏世清， 李艳宾， 苏海锋 西南大学 资源环境学院，重庆 400716 摘要 ：用来 自酸性土壤上紫花苜蓿根瘤 中分离得到的3株能在 pH一4．8的YMA 固体培养基上正常生长 的根瘤茵 进行 回接试验和生长曲线测定 ，结果证 明，菌株 91532耐酸 能力高于其余茵珠 ，并高于 国内外 已报道过的苜蓿根瘤 茵．91532经 16SrRNA分析和扫描 电子显微镜分析 ，鉴定为苜蓿 中华根瘤茵 (Sinorhizobiummeliloti)．pH一4．0的 质子通量试验 中，与酸敏感菌株相 比，91532细胞膜具有较强的阻挡质子能力，细胞具有较高的存活率 ，耐酸能力 具有遗传稳定性． 关 键 词 ：苜蓿 中华根瘤茵；耐酸 ；16SrRNA；扫描 电子显微镜 ；质子通量 中图分类号 ：S154．32；S154．34 文献标识码 ：A 紫花苜蓿 (MedicagosativaL．)是_种适 口性好 、营养价值和可开发价值很高的牧草 1【]．但是 ，紫 花苜蓿 因其对酸 的极其敏感性导致在南方 的种植受到限制．在我国，酸性土壤总面积为 2．03×10hm。， 约 占国土总面积 的21 3【]，主要分布于南方 15个省区，土壤 pH 多在 5．0以下 ，甚至低于 pH=4．5，而且 酸性土壤的面积仍在不断扩大 ]．接种根瘤菌可以促进苜蓿在酸性土壤上的种植 5【]，20世纪 80年代开始 ， 澳大利亚根瘤菌研究中心(CRS)已经分离获得 了若干株耐酸苜蓿根瘤菌 ，它们能使较多的苜蓿属植物在 pH一5．0的土壤上结瘤并能维持较高的产量 ]．目前已报道的耐酸苜蓿根瘤菌菌株的耐酸性有限．因此， 筛选和培育耐酸苜蓿根瘤菌将有助于扩大紫花苜蓿在我国南方的种植． 本研究室分离酸性土壤上生长的紫花苜蓿的根瘤，从 中筛选出了3株能在 pH=4．8的YMA固体培养基 上正常生长的根瘤菌 91512，91522，91532，菌株耐酸性均经过田间 pH=4．5～4．7酸性土壤小 区试验验证 8【]． 本文对这 3株苜蓿根瘤菌进行 了水培回接结瘤和生长曲线的测定 ，并对菌株 91532进行了 16SrRNA测序 、扫 描电子显微镜分析和质子通量试验．结果证明，菌株 91532及其所代表菌株为耐酸的苜蓿 中华根瘤菌(Sino- rhizobiummeliloti)，并具备耐酸菌株在酸性环境中的菌体和细胞膜透性特征．因此，本研究不仅筛选到较耐酸 的苜蓿根瘤菌菌株 ，而且所使用方法也对耐酸微生物的分离筛选有一定借鉴意义． 1 材料与方法 1．1 材 料 1．1．1 供试菌种 苜蓿根瘤菌 91512，91522和 91532分离 自重庆市北碚区缙云山(海拔 650m)酸性 (pH一5．2)土壤中的 收稿 日期 ：2007一O9—24 基金项 目：国家 “973”基金资助项 目(001CB108905)． 作者简介 ：张学军 (1981一)，男 ，内蒙古人 ，硕士研究生 ，主要从事于农业微生物研究 通讯作者：张 磊，博士，硕士研究生导师． 维普资讯 92 西南大学学报 (自然科学版) 第 30卷 紫花苜蓿根瘤 ；96489(酸敏感的苜蓿根瘤菌)菌株取 自中国农业大学微生物资源与应用重点实验室，分离 自新疆沙湾 ，宿主为MsativaL，该菌株在 pH一5．0YMA固体和液体培养基上均不能生长 ，能够耐受 2 的NaC1，是 1株较为