吲哚-2，3-二酮对小鼠骨髓细胞微核和染色体的影响.pdfVIP

山东医药2014年第54卷第33期 吲哚一2，3．二酮对小 鼠骨髓细胞微核 和染色体的影响 孙慧莉，武建凤 (滨州医学院附属医院，山东滨州256602) ． - l 摘要：目的 测试分析吲哚-2，3．二酮(ISA)的遗传诱导毒性 ，为ISA的临床应用提供参考。方法 用高、中、低 三种不同剂量的ISA给小鼠连续染毒，计数小鼠骨髓细胞微核率(PCE中的微核和PCE／NCE比值)和骨髓染色体 畸变率。结果 三种不同剂量的ISA微核形成率分别与阴性对照组比较，其差异无统计学意义(P0．05)，PCE／ NCE比值均在0．71-+0．2正常范围内，而环磷酰胺阳性对照组与 ISA剂量组和阴性对照组 比较均有统计学 (P 0．001)。中期核型分析显示 ，ISA对骨髓染色体无损伤，而环磷酰胺可诱导小鼠染色体致畸。结论 ISA无遗传诱 导毒性。 关键词：吲哚_2，3一二酮；骨髓细胞微核；骨髓细胞染色体 ；遗传毒性；小鼠 doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2014．33．012 中图分类号：R979．1 文献标志码：A 文章编号：1002-266X(2014)33-0032-02 吲哚．2，3．二酮(ISA)又名靛红，系天然存在的 点在载玻片一端预先滴好的小牛血清中，混匀后推 吲哚类化合物，存在于人体和中药青黛以及大青叶 片。甲醇固定 15min，Giemsa染色 15min，冲洗、晾 中，是 目前国内自行研制开发的 I类抗癌新药靛玉 干。依次经低倍镜、高倍镜粗检后，选择细胞分布均 红化学二聚体结构的单体。该物质也存在于龙虾体 匀、形态完整、染色 良好的区域镜检，然后在油镜下 内，是龙虾生存所必需的一种天然海洋活性物 按一定顺序计数微核，计数 1000个嗜多染红细胞 质 j。研究表明，ISA有促进人和小鼠神经母瘤细 (PCE)中含微核的PCE数，并计算 200个细胞中 胞凋亡的作用 J。2012～2013年，我们观察了ISA PCE／正染红细胞(NCE)值。 对小鼠骨髓细胞微核和染色体的影响及其安全性。 1．2．3 骨髓染色体畸变试验染毒模型和染色体标 现报告如下。 本的制备 取剩余的50只小鼠，按 1．2．1的方法分 1 材料与方法 组并给药。于实验第4天给药6h后，腹腔注射秋 1．1 材料 昆明种小鼠(二级)100只，雌雄各半， 水仙素0．02mg／10g，2．5h后用颈椎脱臼法处死， 体质量 18—22g，由河北医科大学实验动物中心提 取出完整股骨并擦净，7mL生理盐水冲洗股骨髓液 供。ISA(上海宜博生物医药科技有限公司)，秋水 于离心管中，反复数次至骨髓发 白，离心弃上清，加 仙素(PH0025，Sigma)，甲醇、冰醋酸、KC1溶液均为 入37℃的0．075mol／LKCI溶液6mL混合均匀，置 分析纯，小牛血清，Giemsa储备液，pH6．8的磷酸盐 37℃恒温水浴 15min，再加固定液 1．5mL摇匀，离 缓冲液。 心弃上清，加入新配制固定液5mL混合，室温下静 1．2 方法 置 15min，离心弃上清。以同样方法重复固定一次。 1．2．1 骨髓细胞微核染毒试验 随机取50只小 留约0．5mL沉淀物，加0．2mL新固定液混匀，得到 鼠，均分为5组，分别为阳性对照组、阴性对照组及 细胞悬浮液。取少量细胞悬液滴于玻片上，轻轻吹 ISA低、中、高剂量组。阳性对照组给予环磷酰胺 散并干燥，滴加 Giemsa染液染色 15rain，纯净水冲 0．2mg／(10g-d)，阴性对照组给予1mL／d生理盐 洗