沙拉沙星和牛血清蛋白相互作用的荧光光谱研究.pdfVIP

第24卷增刊 分析试验室 Vol.解.Suppl. 2005年 10月 ChineseJournalofAnalysisLaboratory 2005一10 沙拉沙星与牛血清蛋白相互作用的荧光光谱研究 曹玺氓，张 敏，杜黎明 ‘ (山西师范大学分析测试中心，临汾041004) 本文研究了在生理条件下沙拉沙星与牛血清 37℃时，K，二3.62x1012Lmol一’·s一，‘r二0.99150 蛋白的相互作用，证实沙拉沙星与牛血清蛋白的 而各类碎灭剂对生物大分子的最大扩散碰撞碎灭 相互结合作用为单一的静态碎灭过程。利用药物 速率常数为2.0x1010Lmol一’.g一’，显然沙拉沙星 对牛血清蛋白荧光的碎灭求得它们间的结合常数 对牛血清蛋白荧光碎灭过程速率常数远远大于扩 和结合位点数，并依据热力学参数确定了它们之间 散控制的Kq，进一步证实沙拉沙星对牛血清蛋白 主要作用力的类型。 的荧光碎灭是二者形成了复合物而引起的静态碎 1仪器与试剂 灭。 LS-50B型荧光分光光度计(美国P-E公司)。 4 结合常数和结合位点的确定 沙拉沙星(中国药品生物制品检定所提供)和牛血 按静态碎灭公式[(17:1g(Fo一F)IF二1gKA+ 清蛋白(上海丽珠东风生物技术有限公司)分别用 nlg[Q」处理实验数据，以19(Fo一F)IF对191Q]作 浓度为0.05mol/LpH7.40的Tris-HC1缓冲溶液 图可得一直线，由该直线的斜率和截距即可确定结 (内含有0.1mol/LNaCl维持体系的离子强度)配 合常数KA和结合位点数n，在t二17℃时，r二 成5x10-4mo/lL的溶液，使用时逐级稀释。其它 0.9946,K,,=2.37x104，n=0.935;t=37℃时，r 试剂均为分析纯，实验用水均为二次亚沸蒸馏水。 =0.9983,KA=1.03x1了，n=0.888。由此可知， 2 实验方法 沙拉沙星与牛血清蛋白相互作用时具有一个结合 准确移取5x10-5mo/lL的牛血清蛋白0.6mL 部位。 于10ML比色管中，分别加人一定量的5x10-5 5 沙拉沙星与牛血清蛋白作用力的确定 mo/lL的沙拉沙星溶液，用缓冲溶液定容至刻度后 当温度变化不大时，反应的熔变△H可以看作 摇匀，放置0.5h进行荧光测定。激发波长Aa= 一个常数，根据两个温度下的结合常数求出沙拉 272mn，激发和发射狭缝宽度均为2.5nn. 沙星与牛血清蛋白相互作用的△H=一31.34kJ/ 3 荧光光谱及碎灭类型的确定 rnol,17℃时△‘二一22.27kJ/mol,AS二一31J/mol 固定牛血清蛋白的量，随着沙拉沙星浓度的增 K,熔变△H0,嫡变△S0。根据热力学参数与 大，牛血清蛋白的内源荧光强度有规律地降低，同 作用力的关系1[21，可知沙拉沙星与牛血清蛋白结 时在较长波长处出现药物的荧光峰渐强。分别测