鸭疫里氏杆菌JS01株的分离鉴定与生物学特性研究.pdfVIP

沙门氏菌、鸭疫里默氏杆菌 鸭疫里氏杆菌JS01株的分离鉴定及生物学特性研究 张敬峰，李银，刘宇卓，魏雪涛 (江苏省农科院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京210014) 鸭疫里默氏杆菌(Riemerella啪atipeBtifer，RA)行培养特性、纯净性等生物学特性测定。 是鸭传染性浆膜炎的病原菌，可引起1．8周龄鸭大 1．9动物回归试验将单个分离菌在改良LB液 批发病、死亡，生长发育严重受阻，严重阻碍了养鸭 体培养基中培养至10×108／rnl，分别经静脉、肌肉及 业的健康发展。笔者从镇江市某发病肉鸭场分离了 足底接种15日龄雏鸭各5只，0．2“／只，另设空白 一株细菌，经鉴定为RA，对该菌株进行了生物学特 对照组5只，连续观察10日。 性研究，旨在为该病的防控及疫苗研究提供依据。 2结果与分析 1材料与方法 2．1病原分离从发病鸭中分离得到疑似RA菌 1．1病料采自镇江市某肉鸭场送检病死鸭。 株1株，命名为JS0l株。该菌株在血琼脂平板上为 1．2培养基及试剂血琼脂平板、微量生化发酵 半透明、光滑、湿润、微隆起的小菌落。革兰氏染色 管购自杭州微生物试剂公司；改良LB培养基为本 镜检为G一小杆菌，多单个存在。 实验室自制；PCR试剂盒、pMDl8．T载体以及凝胶回2．2生化鉴定及药敏试验JS0l株不分解葡萄 收试剂盒均购自Takam公司。 糖、果糖、木糖、乳糖等，同时结合菌体和菌落形态、 1．3分离培养及形态观察无菌采取病死鸭的脑 临床流行病学资料，初步确定JS0l株为RA。该菌 组织、肝脏组织和心血，接种于血琼脂培养基和含 株仅对头孢噻肟、多粘菌素B敏感。 3％小牛血清的改良LB平板上，置厌气缸中37℃温 2．3PCR鉴定PCR产物用1％琼脂糖凝胶电 箱培养24。48h，挑取典型单个菌落涂片，革兰氏染泳，可见在800bp左右有目的条带，回收条带，测定 色，并将疑似RA菌落进行纯化培养。镜检，观察其 序列与发表序列的同源性在99％以上。 形态特征。 2．4菌种保存及传代Js01株4℃条件下保存在 1．4生化试验挑取分离株的纯培养物。接种微 液体和固体培养基上分别可存活1周和2周；20％ 量生化反应管，置37℃温箱培养24h～48h，观察结 甘油菌液保存在一20℃可存活7个月以上。Jsol株 果并记录。 目前已连续传至22代，该菌株的培养特性、纯净性 1．5PCR鉴定用DNA抽提试剂盒进行DNA的等生物学特性均未发生变化。 抽提，利用本实验室设计的跨幅800bp左右的1对 2．5动物回归试验JS0l株静脉与足底接种鸭在 PCR反应体系，进行PCR扩接种后24h开始死亡。至96h全部死亡(5／5)，肌肉 特异性引物，采用50pL 增，分析PCR产物。 组共死亡2只(2／5)，对照组均健活。从攻毒死亡鸭 1．6药敏试验无菌挑取细菌纯培养物在改良 体内均分离到RA。 LB琼脂平板上均匀涂布，取药敏片贴于琼脂平板 ◆考文献 4—48 上，37℃温箱培养2 h，观察并记录结果 1．7菌种保藏试验分别将分离株的液体、固体 [I]殷震．刘景华．动物病毒学．第二版[M]．北京：科学出版社 培养物放置4℃保存，并将加入20％甘油的菌液置 1997． [2]程安春．汪铭书．陈孝跃。等．我国鸭疫咀默氏杆菌血清捌调查 一20℃保存。定期将上述保存菌种取出测定活性。 及新血清型的发现和病原特性[J]．中国兽医学报