人支气管上皮细胞恶性转化系统替代动物长期致癌实验的基础的研究.pdfVIP

人支气管上皮细胞恶性转化系统 替代动物长期致癌实验的基础研究 袁素波廖明阳 周嚣 陈光宇 (军事医学科学院毒物药物研究所，北京，100000 国家北京新药安全评价研究中心，北京，100000) 以体外实验方法替代动物体内实验进行新药及各种健康相关产品的安全性评价可 以减少动物用量，降低实验成本，提高检测效能。用于确认化学物质致癌性的长期动 物致癌实验因需数百只啮齿类动物终身染毒和观察而成为安全性评价实验中成本最 高、耗时最长的困难实验，亟须研究寻找有效的体外实验替代方法。80％的人类肿瘤 都是起源于上皮细胞的癌症，本研究设想用入支气管上皮细胞恶性转化系统替代长期 动物致癌实验来检测化学物质的致癌性。研究以国际癌症研究署(IARC)确认的药 hu— manbronchial epithelialcells，BEAS一2B)诱导其恶性转化，以转化细胞在裸鼠体内成 瘤为致癌性检出的标志并伴随研究了恶性转化过程涉及的相关机制。 1．塞替派诱导人支气管上皮细胞发生转化及转化细胞的增殖动力学特 征 BEAS一2B细胞经TE1．5mg·L-。、CFE13．1％的剂量染毒处理后的细胞命名为 BEAs—TE细胞，细胞发生转化后生长速度慢于、生长密度低于对照细胞。BEAS一 2B处于细胞周期各期的细胞比例基本稳定，BEAS—TE细胞随着细胞转化代龄的延 伸而出现GO／(31期细胞比值急剧下降，S期细胞比例上升的现象；第10、23代 化细胞独特的增殖动力学特征和显著增高的软琼脂集落形成率说明，细胞已完成癌 前转化并具有较高的转化程度。 2．转化细胞的染色体非随机性改变 体，至25代时，四倍体及以上倍体细胞比例上升达86％：软琼脂集落细胞(BEAS 单体型。相应形成M1、M2、M3三个标志染色体，维持较为稳定的近二倍体核型： 183 畸变，其中双着丝粒19％，并有2对形状怪异的巨型三着丝粒染色体。以上结果说 明，细胞在转化过程中发生了一系列的与恶性转化相关的染色体非随机性改变。 3．转化细胞的裸鼠成瘤性 对照和转化细胞裸鼠接种26周后，对照组6只裸鼠无一长出肿瘤，转化组有5／6 鼠的肿瘤直径都在lcm以上，说明转化细胞已具备典型的恶性转化表型。肿瘤组织 的病理切片经北京大学临床肿瘤学院病理科诊断：肿瘤组织是由人上皮组织和间叶组 织来源的细胞共同组成的恶性程度较高的癌肉瘤。 4．瘤细胞的体外建株及生物学特性研究 5只荷瘤鼠的肿瘤组织块，经体外建株共获得3株裸鼠肿瘤细胞株，命名为 TTc细胞。细胞经免疫细胞化学检测确认其人源化上皮组织来源。 株肿瘤细胞生长速度明显慢于BEAS一2B细胞，并有显著性差异。BEAS一2B细胞倍 增时间为22．5h，BEAS—Tra，b，c3株细胞均在35h以上，明显长于B＆峪一2B细 胞。此结果提示恶性程度较高，致瘤性较强的细胞，其倍增时间较长，生长速度较 慢。此与BEAs—TE细胞增殖速度慢于、倍增时间长于BEAs一2B的现象一致。 转化细胞在软琼脂介质中集落形成率的高低是其恶性程度高低的重要标志。 构更为致密和紧束，空间立体感更强。说明转化细胞在裸鼠体内的成瘤过程中其三维 空间生长能力得到了进一步的加强。 程中近二倍体细胞比例始终维持在85％左右。说明多倍体肿瘤细胞较二倍体肿瘤细 胞具有更强的恶性增殖优势和致瘤性。BEAS—TTs(a、b、c)细胞核型相似，相对 瘤过程的重要的染色体畸变事件。 实验成功地运用塞替派诱发人支气管上皮细胞恶性转化，实验在体外条件下模拟 184 了体内受致癌原作用后的靶细胞向肿瘤细胞的演变过程，在细胞水平获得了典型的细 胞恶性转化表型，在裸鼠体内证实了转化细胞的恶性致瘤性，在瘤细胞株上观察到了 恶性肿瘤细胞的典型生物学特征，在致癌机理的不同层次上证实了人支气管上皮细胞 恶性转化系统可以有效地检出受试物的致癌性，可以作为替代长期动物致癌实验的备 选方法。 185