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头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌研究
胡付品浞叶信予周乐 朱德妹
近年来，在医院感染中，革兰阳性菌所占的比例有逐年上 (一)苯唑西林纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌：按
升的趋势，其中，葡萄球菌属又占据着主导地位。葡萄球菌属 常规药敏试验方法进行操作。
中耐甲氧西林葡萄球菌可产生一种青霉素结合蛋白r,Bpu， (二)苯唑西林盐平板试验检测耐甲氧西林葡萄球菌：按
使B一内酰胺类抗生素不易与之结合而产生耐药。因此，耐 NCCLS标准操作规程进行，挑取单个纯分菌落于生理盐水中
制备成0．5麦氏单位的菌液，然后用棉签接种于苯唑西林盐
甲氧西林葡萄球菌(~妇Rs)与甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)感
染的治疗也截然不同，临床微生物实验室应注意耐甲氧西林
葡萄球菌的检测，为临床合理选用抗菌药物提供依据。 培养，24h后观察结果(对于凝固酶阴性葡萄球菌，24h培养
目前临床微生物实验室一般用苯唑西林纸片扩散法检测 结果阴性者需延长培养至48h)，凡在苯唑西林盐平板上有任
葡萄球菌中的MR菌株，由于依据苯唑西林对金葡菌的抑菌 何可见的菌落生长者(≥1个菌落)即判断为耐甲氧西林葡萄
球菌。
圈直径来判断MR株时，其判断标准存在中介值(11～
(三)、头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌：
12mm)，对于处于中介值的菌株必须再用含6ug／ml苯唑西
林、4％Nacl的苯唑西林盐平板进行确认，这使得报告结果的按NCCLS常规药敏试验操作进行，其判断标准如下表所示。
时间将推迟1天。另一方面，苯唑西林盐平板的配制操作比 (四)PCR检测葡萄球菌中的n1以基因
TE
较烦琐且保存时间不超过一周。一般认为，以PCR法检测葡 1．模板的制备：挑取单个纯分菌落于含有lmlbuffer
000r／rain
的Eppendorf管中，然后置于沸水中煮沸13rnin，8
萄球菌中的mecA基因(me馥基因法)为判断MR菌株的“金
离心5min后提取上清液2pl作为PCR的模板。
标准”，美国国家实验室标准委员会(NCCLs)2004年版推荐
以头孢西丁纸片扩散法检测MR菌株，且判断标准为抑菌圈 2．反应体系：总体积50va，其中PCR
dNTP DNase
直径≤19 Irlrn 4th，引物1和引物2各1出，Taq0．25出，模板
nllTl为MRSA，≤24rllln为MRCNS；反之，≥20
33．75止。
和≥25 29l，ddH20
mln则分别为MSSA和M9CNs。为验证头孢西丁纸
片扩散法的准确性，我们以n、出基因法结果为标准，检测了 3．反应条件为：①预变性94℃×5min②循环条件为：
2004年2月～2004年4月上海复旦大学附属华山医院临床
分离的190葡萄球菌，现将结果报道如下。
材料与方法 物进行检测，结果如图1所示。以金黄色葡萄球菌
一、材料
性葡萄球菌临床分离株04—197金葡菌。
1．细菌：2004年2月--2004年4月上海复旦大学附属华
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