利用噬菌体随机肽库筛选传染性法氏囊病病毒VP3抗原表位.pdfVIP

利用噬菌体随机肽库筛选传染性法氏囊 病病毒VP3抗原表位 邓小芸 高玉龙 高宏雷 祁小乐 程 宇 王晓艳 王笑梅 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，禽传染病研究室， 黑龙江哈尔滨，150001 关键词 传染性法氏囊痛病毒(IBD、r)VP3抗原表位 噬茵体随机15肽库 bursal bufsaldis— 传染性法氏囊瘸(1nfectous 的脯氨酸。并形成一个碱性区。该区域可与病毒纂因组发生楣置连接，有稳定病毒RNA的作用．此外， VP3还与VP2、VPl存在相互作用，是癍毒包装和毒力豹必需基因o～． 抗原表位作图是I肋V分子生物学研究的萤要组成部分，对谈病的诊断、骈发无毒羽作用的多表位 疫茼以及免疫治疗试鹅等具有积极的意义．1BDVVP2蛋良抗原袤位研究已有详细的报道，烹要集巾 莆次以4株mDV 噬菌体随枫15默库进行淘洗。撙到了IBDV 阐明IBDV致瘸机制及多袅位疫苗的耩发夔定了基础． 一、材料与方法 (一)辛|料 mDV 哈尔滨酱医研究所免疫抑制病课题级翩备‘“]，革克廉抗体泼水经辛酸一硫酸铵盐析洼纯化；HRP一羊 Ph8macia 抗鼠M13二抗为AmerslIamBiotech公司产品． (二)随机肽库 TAGTTA 赠，随机肤库噬菌体滴淡l。l×10”pfu／mL．测序写l物：5’一COCTCA ·82· (三)肤库的生物淘洗 IPBST洗涤10遍I用100|‘LO．2moI／L 遣，加入含2×10”pfu噬箧体的肽库原液，室温作用1h Gly 1mol／L —HCI(pH2．2)洗脱8nlinI加入15肛L 按上述步骤分别再淘洗2次．经过3次淘洗后，从每株单克隆抗体筛出购噬菌斑中藉机挑取单竞隆噬 蔼斑20个，4株单完隆抗体合计80个进行扩增．所用溶液无菌处理，并在空气净化条件下进行． (四)噬菌体滴度测定 1．可贮存豹饥饿细胞制墨 mL 培养液中，37℃尉熬振荡至o‰为o。45，140rpm摇5蚰n；4℃离心，弃上清，用20 憨I lM —C1)悬起，在球箱中备用。 2．立即使用的饥饿细脆制惫 ． 培养液中，37℃剧烈振荡至l／10oD‰为O．1～o．2，140rpm摇5min，必须在lh内使用． 3．漓度测定 mL【墨培 养液(四环素浓度为0t 菌落数×稀释倍数×103／lO． (五)噬茵休扩增 mL 将洗脱的褒菌体加人到lmL饥饿细胞中，37℃、140rpm摇15min；倒入预热的20L8培养藏 (四环索浓度为20严g／mL)，37℃剧烈振荡过夜培养． (六)沉淀噬茵体 将37℃剧烈振荡过夜培养的噬菌体收集，4℃、lo NaCl)，4℃过液，然后4℃、10 积的PEG／NaCI溶液(禽20％PEG8000和2。5mol／L 15