免疫层析试纸条(ICS)检测禽流感抗体地研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会论文集 免疫层析试纸条(ICS)检测禽流感抗体的研究 张喜悦，陈义平，冯娟，吴晓东，刘春菊，王志亮 (农业部动物检疫所诊断液研发中心山东青岛266032) 摘要：以纯化的禽流感(AIV)核蛋白作为捕捉抗原，金标兔抗鸡抗体作为金标二抗，建立检测禽流感血清抗体的胶 体金免疫层析试纸条(ICS)。对标准阳性血清不同滴度进行检测，ICS试验的敏感性高于琼脂扩散试验(AGP)。特异性 ICS试验和HI试验检测105份鸡血清，弱者具有较好的符合性。结果认为：禽流感ICS具有快速简便、特异灵敏等优 点，而且不需要任何的专业技能和仪器设备。 关键词：免疫层析试纸条；禽流感；抗体 禽流感(AvianInfluenza，AI)是由A型流感病毒1材料和方法 引起禽类疾病的总称。禽流感检测中最重要的就是 1．1 血清学诊断方法，国内外对其进行了深入的研究。 CM-4000压膜机为美国Biodot公司产品。 1974年,Jenning等首先用酶联免疫吸附试验 1．2硝酸纤维素膜(NC膜)、玻璃棉、吸水纸、支持 (ELISA)对AIV抗体的消长规律进行了研究；1993 板、塑料盒为德国S．S公司产品。 年，Skodihau等建立了快速诊断禽流感的 1．3氯金酸、兔抗鸡抗体、羊抗兔抗体为SIGMA DAS—ELISA法；我国也建立了禽流感HI检测体系。 公司产品。 t998年，李海燕等研制了AI抗体间接ELISA检测 1．4 AIV核蛋白纯化抗原由本实验室自行研制， 法；1999年哈尔滨兽医研究所建立了Al抗体斑点 杆状病毒表达的AIV重组核蛋白，经浓缩纯化而 一ELISA检测法；2000年，李海燕等建立了以杆状病 成。 毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的AI间接ELISA 1．5禽流感Hl诊断试荆、琼脂扩散试验(AGP)抗 诊断技术。我们在众多学者研究的基础之上，利用 原 为农业部动物检疫所、哈尔滨兽医研究所产 重组的AIV提纯核蛋白，研制一种新型的胶体金诊 品。 断方法。胶体金技术是上个世纪末发展起来的一种 1．6禽流感标准阳性血清由本实验窒保存，AGP 检测新技术，近年来得到了飞快发展；如Holgate等 试验为阳性，HI效价为27。 (1983)建立了免疫金银染色法(IGSS)；Engler(2004) 1．7禽流感标准阴性血清共计两份，一份为本实 及Putalun(2004)分别研究了检测白喉毒紊等成分 验室保存，AGP试验为阴性，HI效价为2，；一份为 的免疫层析试纸条；我国周继文等制成了检测乙肝 血清采自SPF鸡，HI效价为22，济南SPF鸡场提 表面抗原的免疫层析试纸条；张改平(2001)研制了 供。 检测法氏囊病毒的快速诊断试剂条，黄印尧等 1．8金标兔抗鸡抗体的制备按柠檬酸钠还原法 (200