基因工程及应用[上学期.pptVIP

§6.2 基因工程简介 我们知道： 1、青霉菌能够产生对人类有用的抗生素——青霉素 2、豆科植物的根瘤菌能够固定空气中的氮 3、家蚕能够吐丝…… 我们能不能通过改造生物体的基因，定向改变生物的遗传性状呢？ 比如： 1、让水稻、玉米能够固定空气中的氮； 2、让细菌吐丝； 3、让微生物产生人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物…… 这就要用到定向改造生物的新技术 ——基因工程 一、基因工程的概念 基因工程又叫DNA重组技术或基因拼接技术。 这种技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 通俗地说，基因工程是指将特定的基因，通过载体送入受体细胞，使它们在受体细胞增殖并表达的一种遗传学操作。 作用：定向改造生物的遗传性状。 实 例 人们通过基因工程培育一种抗虫棉，它可以产生毒素，杀死害虫。毒素是蛋白质，表达它的基因是从苏云金芽孢杆菌中提取出来，放入棉的细胞中，与棉细胞中的DNA结合起来，在棉中表达并发挥作用。 二、基因操作的工具 ①基因的剪刀──限制性内切酶 （限制酶） 存在：主要存在于微生物中。 特点： 每种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且各种酶的切点具有专一性，在特定的切割点上将DNA 分子切断。 种类：目前已发现的限制酶有200多种。 实 例 从大肠杆菌中发现的一种限制酶，只能够识别GAATTC序列，并且只能在G和A之间将这段序列切开。 ②基因的针线──DNA连接酶 作用：将两段DNA片断拼接起来，即把两个粘性末端之间的缝隙“缝合”起来，使之成为一个完整的DNA分子。 ③基因的运输工具──运载体 作为运载体必须具备以下条件： ① 能与目的基因结合； ② 对受体细胞的生存没有决定性作用； ③能够在受体细胞中复制并稳定保存； ④具有多个限制酶切点，便于与外源基因连接； ⑤具有标记基因，便于进行筛选、检测。　　 常用运载体：质粒、噬菌体、  动植物病毒 质粒 存在：存在于细菌及酵母菌的染色体以外。 特性：是很小的环状DNA分子，在细胞染色体外能够自我复制。 大肠杆菌质粒的分子结构示意图 习 题 1、重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体。 （ ） 2、限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列。 （ ） 3、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列。 （ ） 4、科学家们经过多年努力，创立了一种新兴生物技术——基因工程，实施该工程的最终目的： （ ） A.定向提取生物体的DNA分子 B.定向地对DNA分子进行“剪切” C.在生物体外对DNA分子进行改造 D.定向地改造生物的遗传性状 5、下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体是：（ ） A.细菌质粒 B.噬菌体 C.动植物病毒 D.细菌核区的DNA 三、基因操作的基本步骤 ①提取目的基因 目前比较广泛提取使用的目的基因有：苏云金芽孢杆菌抗虫基因、植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子的贮藏蛋白的基因、人的胰岛素基因、干扰素基因等。 （1）从供体细胞的ＤＮＡ中直接分离基因——鸟枪法 用限制酶将供体细胞的DNA切成许多片段，将这些片断分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞所提供的外源DNA的所有片断分别在各个受体细胞中大量扩增，从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把带有目的基因的DNA片断分离出来。 优点：操作简便。 缺点：工作量大，带有一定的盲目性，成功率低。 应用：许多抗虫、抗病毒基因的提取。 （２）人工合成基因 ａ、逆转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下，逆转录成互补的单链DNA，然后在DNA聚合酶的作用下，将脱氧核苷酸合成双链DNA。 ｂ、逆推法：根据已知的蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，再根据碱基互补配对原则推测出它的结构基因的脱氧核苷酸序列。最后以游离脱氧核苷酸为原料合成目的基因。 应用：人的血红蛋白基因、胰岛素基因。 DNA序列自动测序仪 DNA测序仪显示的碱基排列顺序 DNA合成仪 应用：人的胰岛素基因就是通过这种方式与大肠杆菌质粒DNA分子结合，形成重组DNA分子（也叫重组质粒）的。 ③将目的基因导入受体细胞 常用的受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 导入途径：（以运载体是质粒，受体