农杆菌浸种法介导中华结缕草遗传转化体系的建立.pdfVIP

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2017-08-14 发布于北京
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农杆菌浸种法介导中华结缕草遗传转化体系的建立.pdf

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农业生物技术学报 Journal ofAgriculturalBiotechnology 2009,17(5):865~871 ·研究论文 · 农杆菌浸种法介导中华结缕草遗传转化体系的建立 * 1 **, 1 , 2 , 3 , 1 雷江丽王丹吴燕民刘水吕慧 (1. 518003 2. 100081 深圳市园林科学研究所，深圳；中国农业科学院生物技术研究所，北京； 3.深圳市铁汉园林绿化有限公司，深圳 518034) 摘要：以中华结缕草( Hance)萌动种子为转化受体，利用新霉素磷酸转移酶基因(neomycinphosphotransferase 域， )作为筛选基因，对影响根癌农杆菌( )介导的遗传转化外部因素进行了实验，通过优化转化条件，建立了农杆菌浸种途径介导的中华结缕草遗传转化体系。结果表明，利用催芽 6~7 d 的种子，加入 600 为 0.9 的农杆菌浸 ( 100 mol/L ) 5min 30 s ，振荡浸染染菌液在浸染菌液中添加滋乙酰丁香酮，附加抽真空并在迅速恢复常压后再抽真空的处理 48h，共培养 3d后用 75mg/L 卡那霉素筛选能够获得较好的转化效果。通过对卡那霉素抗性苗进行 PCR 检测和 GUS组织化学染色，初步验证和葡萄糖苷酶基因( glucuronidase, 已经整合进植物基因组，阳性转化率为 55.21%。茁茁关键词：中华结缕草；农杆菌浸种法；遗传转化中图分类号: S188 文献标识码: A 文章编号: 10061304(2009)05086507 Establishment ofGeneticTransformation System ofChineseZoysia( )Mediatedby Soaked Seeds 1 1 2 3 1 LEIJiangli **,WANGDan ,WUYanmin ,LIU Shui ,LVHui A highfrequency transformation system hasbeen established by soaked seeds transforma tion technology anduseing Hancegerminating seedsastransformationreceptor.Ex