炎症在2型糖尿病大鼠动脉粥样硬化的作用与机理研究.pdfVIP

炎症在2型糖尿病大鼠动脉粥样硬化的作用及机步／石开究 祁燕1曾小云2谢自敬2 材料和方法 一、材料 1．实验动物：Wistar雄性大鼠50只，体重170—2209，由新疆医科大学中心动物房提供。 a试剂盒购自晶美生物工程有限公司；胰岛素放射免疫分析药盒购自解放军东亚生物免疫 所；血糖用德国罗氏电化感应法测定；血脂在新疆医科大学第一附属医院采用全自动生化分 析仪测定。 二、方法 1．制备2型糖尿病动物模型：将40只Wistar雄性大鼠喂高糖高脂饲料(饲料组成：10．096 的猪油，20．O％蔗糖，2．5％胆固醇，1．O％胆酸盐，66．5％常规饲料)一个月，自由饮水，禁食 12h后，将STZ冰浴下按lOmg／ml溶于柠檬酸缓冲液，后由药学院协助将制成的STZ溶液以 25mg／kg经精索静脉注射。注射后第7天用罗氏血糖仪测晨空腹尾毛细血管血糖，以不同时 间测三次空腹血糖均≥7．8mmol／L作为糖尿病成功标准。 2．动物分组：以基础饲料喂养的大鼠为正常对照组(简称对照组)10只，将造模成功 的2一DM大鼠30只随机分为3组，并继续喂以高脂饲料，直至实验结束。其中糖尿病模型组 (简称造模组，不加任何干预)10只，本文单就糖尿病模型组进行探讨。 3。取材与组织处理：采样前空腹12小时，自由饮水，测体重(w)、血糖(BG)及采血， 血标本采集时间通常在上午10点以后，从眼内眦静脉获取，全血在1小时内离心，在冰浴 条件下取血，并立即放入-70℃低温冰箱保存备用，采血后在1％戊巴比妥麻醉下(30mg／kg) 11m。 取腹主动脉段，用10％中性福尔马林固定后石蜡包埋切片，切片厚度2 4．检测 (1)血清IL一6、TNF—Q、CRP、血浆PAI一1使用ELASA法测定 (2)血胰岛素测定：采用放免法。 固醇(HDL-C)由新疆医科大学一附院检验科全自动生化分析仪测定。 5．TNF Q和L-6组织表达的免疫组化检测：切片脱蜡水化后入3％过氧化氢液10分钟， 枸橼酸抗原修复液解冻8分钟，小牛血清孵育30分钟，分别滴加TNFQ单克隆抗体和IL-6 次，再滴加链霉素抗生素一过氧化物酶溶液(Ⅲ抗)孵育20-30分钟，PBS洗3次，DAB显色、 苏木素复染、光镜观察，胞膜或胞浆呈棕黄色者为阳性表达细胞。六个高倍镜视野，以高倍 6．动脉粥样硬化形态学观察：切片脱蜡水化、常规HE染色、光镜观察。 7．计算指标：用稳态模式胰岛素抵抗指数(HomaIR)和李光伟的胰岛素敏感指数(IAI) 胞功能指数(皿CI)作为胰岛素分泌指标：HBCI=20×FINS／(FPG-3．5)。 非正态分布，均进行自然对数变换，各数值以X±J表示，多组间比较用方差分析，两两比 较用q检验。等级资料用秩和检验。 作者单位z 1 830003新疆医科大学附属中医院内分泌科2新疆医科大学第一附属医院内分泌科 116 结果 一、各组大鼠的FRS．FINS，Ho岫IR，Ⅲ℃I，IAI比较 P(0 01， 05)．IAT，HBCI远远低于 造模组组FBG，FT辐，H．n,afR明显高丁对j!(i组P0 对照组(P00I)。 二、两组大鼠的Tc．TG，肿L_c。LDL-C的比较 0l P0 遗模组的Tc，TG，LDLC明显高十其他并组(P0 05)，造模甜HDI则明 显低r对j{ff鼬(P001)。 三、各组大蕾盯炎症介质和凝血因子的比较 造模组组的TNF吨【L_6，CRP，mII均高于正常对照组(P(001，P005)。 四、各组大鼠动脉壁T砸一a、IL-6的表选 造模组动脉壁IH卜Ⅱ、IL_6的表达远远高于对照H【(P=005，P0叭)。 在免疫组化中，IL一6和TNFo在糖屎病大鼠的大m管内膜、中膜及外模细胞的胞浆及细 胞问质均有大量表达，(见下周)， HFnA女《目^日目％m∞“F。☆JT#^H自R％∞I L 6n#H自№$Ⅲ^H#11 69t*Ⅲ^H日n《∞ ※4，