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结核分枝杆菌细胞色素 P450 酶研究进展  卢芸 游雪甫 杨信怡† （中国医学科学院医药生物技术研究所北京 100050） 摘 要 结核病至今仍是一种常见传染病，目前全球约三分之一人口有结核菌感染。其中，我国和印度 的结核病发病人数约占全球结核病病例的 40% 。近些年来，世界范围内，耐多药和泛耐药结核病发 病人数不断增加。而当前临床使用的一线抗结核药物品种有限，疗程漫长，药物靶标单一。同时， 新型抗结核药物发展缓慢，多数仍局限于传统药物的结构优化和联合用药。因此，具有全新作用机 制的抗结核药物有待进一步加强，其中，寻找新型抗结核药物靶标是关键策略之一。结核分枝杆菌 H37Rv 的全基因组测序的完成，标志着结核菌研究从此进入功能基因组时代。基因组对比分析发现， 全长 4.4Mbp 的结核菌染色体DNA 中存在多达20 种细胞色素 P450 的编码基因。基因组中高密度的 P450 基因分布，表明其在结核菌生长代谢中具有很重要的地位。研究发现，结核分枝杆菌 P450 超 家族酶系在结核菌脂质代谢与合成、胆固醇利用、呼吸链电子传递等方面均扮演十分重要的角色。 其中，CYP121 和 CYP128 为菌体生存必需；CYP125、CYP142 参与代谢、利用宿主胆固醇，为结 核菌感染必需；CYP51 有原核生物甾醇脱甲基化活性；CYP124 是甲基脂肪酸类羟化酶，参与结核 菌细胞壁脂质生物合成。目前还有十种 CYP450 亚型的功能还处于未知阶段，有待进一步的探索。 在这 20 种结核分枝杆菌 CYP450 中，已有 6 种亚型的蛋白质晶体结构得到阐明，这为进一步探索其 功能及作用机制，寻找潜在的抑制剂提供了结构基础。加之，结核分枝杆菌 P450 与真核细胞 P450 有较大差别，且各亚型间同源性较低，为特异性筛选抑制剂提供了基础。研究发现，唑类抗真菌药 对已研究的结核分枝杆菌 CYP450 亚型都具有较高的亲和力，唑类抗真菌药在体内、外研究中对活 跃、潜伏期的结核分枝杆菌均有抑制作用。以 CYP121、CYP51 为靶，筛选得到的唑类小分子化合 物，也为新型抗结核药物的发现带来了希望。 关键词 结核分枝杆菌 ； CYP450 ；唑类抗真菌药 前 言 结核病（TB ）至今仍为重要传染病，WHO 统计显示，2011 年估计 TB 新发病例 870 万（13％ 合并 HIV 感染），病死人数 140 万（43 万为 HIV 阳性），是仅次于 HIV 的第二大传染病杀手。更为 严峻的是，世界范围内，耐多药(MDR-TB)及泛耐药结核病(XDR-TB)发病人数不断增加[1] 。化疗是 TB 治疗的主要手段，然而，几十年来，抗 TB 化疗新药发展缓慢，其中，新型可药性靶标的发现相 对不足是限制抗 TB 新药发展的瓶颈之一。 作者简介：卢芸，女，生于1989年，在读博士。研究方向：抗菌药理与作用机制 Email ：yunluly@163.com †通讯作者：杨信怡，男，副研究员，硕士生导师 Email ：yangxinyi1976@ 基金项目：国家自然科学基金 478 细胞色素 P450 酶 （Cytochrome P450，以下简称CYP450 ）是一类含铁血红素的单加氧酶超家族， 广泛分布于各类生命形态中，扮演重要的生物催化剂角色。但微生物中，大多数细菌和低级真菌基 因组中缺乏CYP450 编码基因[2] 。1998 年，结核分枝杆菌（M. tubetrculosis, 以下简称Mtb ）H37Rv 全基因组测序工作完成，一些研究者在基因对比研究中意外发现，全长 4.4 Mbp 的Mtb 染色体 DNA 上竟存在 20 种 CYP450 的编码基因，如此密集的基因分布提示其在 Mtb 的生命活动中必然具有重要 地位。随后，一些研究者对 Mtb CYP450 的结构和功能进行了相关研究，发现 P450 超家族酶系在 Mtb 脂质代谢与合成、胆固醇利用、呼吸链电子传递等方面均扮演十分重要角色[3]，其中 6 个亚型 的结构已明确。虽目前有近一半Mtb CYP450 亚型的结构和功能尚未被阐明，但研究提示Mtb CYP450 可能成为一类新型抗 TB 药物的靶标。本文将从基因同源性、蛋白结构、功能等多个方面对已研究 的