对稻瘟病表现抑制活性放线菌的筛选.pdfVIP

生物防治 477 对稻瘟病表现抑制活性放线菌的筛选· tocontrol Pyriculariagrisea Screeningactinomycetes 文孟良2 杨佩文1欧敏功2尚慧1李一青2刘树芳1李铭刚2崔晓龙2李家瑞1 (1云南省农业科学院农业环境资源研究所，昆明650205；2云南大学教育部微生物资源 开放研究重点实验室，云南省生物资源保护与利用重点实验室，昆明650091) 摘要：采用平板稀释法分离到334株放线菌，以稻瘟病菌作为指示菌，进行其发酵提取物的农抗活性筛 选。通过孢子萌发抑制测定，筛选出对孢子萌发具有极高抑制活性的菌株20株；在此基础上，进行菌丝 生长抑制作用测定，筛选出对菌丝生长具有较高抑制活性的菌株7株；最后对这7个菌株进行活体防治 效果测定，筛选出防病效果较好、防治效果持久的3株菌株。 关键词：稻瘟病；放线菌发酵提取物；抑菌活性；防治效果 植物病害是影响农业生产的主要因素之一，目前植物病害防治仍主要依赖化学农药， 这不仅造成环境污染，还易诱发病原菌产生抗药性。因此，植物病害的生物防治越来越引 起人们的关注【l~6l。微生物发酵提取物中的小分子活性化合物是开发利用微生物资源的重 要物质基础，而放线菌发酵提取物具有分子结构与作用机制多样化的特征，是一类具有开 发潜力的新型微生物源农药，通过对其生物活性和机理的研究进行新农药的创制具有重要 的理论和实际意义【7—10】。从上世纪40年代起，随着青霉素、链霉素等抗生素的发现，并 在医学上取得卓越疗效而大量应用之后，利用抗生素作为农药的开发应用得以迅速发展， 无公害的农用抗生素，而且把抗生素的开发研究扩大到在微生物代谢产物中筛选杀虫、除 草、抗病毒和植物生长调节剂等生理活性物质的研列7~10】。本试验拟在利用云南丰富的放 线菌资源，对其发酵提取物抑菌活性进行筛选，为开发新颖的、与环境相容性好的微生物 农药提供素材。研究结果报道如下。 1材料和方法 1．1供试放线菌 供试334株放线菌为云南各地土壤中采集和分离到的菌株。 1．2放线菌发酵培养液 ’基金项目l云南省自然科学基金重点资助项目(2004c0002z)． 通讯作者：李家瑞。研究员，主要从事植物病理学研究．ppiyaasOpublic．I‘I啊．yn．cn． l孵yan920000yahoo．COal．cn． 478 中国植物病理学会2006年学术年会论文集 48h后，再按10％的接种量接种于lOOml发酵液中，220rpm振荡培养120h。 1．3发酵液的后处理 并在旋转蒸发仪上蒸去乙醇，水相采用冻干仪冻成千粉后置于提取物保存库备用，测定活 性时用无菌水溶解、稀释定容到发酵原液的浓度。 1．4放线菌的筛选 1．4．1供试病原菌 稻瘟病菌用燕麦培养基于24℃下培养，待菌丝长满培养基后，用自来水洗去气生菌丝， 低倍镜下每个视野30,-一40个孢子，待用。 1．4．2孢子萌发抑制测定 将放线菌发酵提取物与孢子悬浮液等体积混合，取一滴滴加在凹玻片上，每处理3次 重复。在25℃下保湿培养18h后检查对照孢子的萌发。当对照的孢子萌发率达到85％后， 检查所有处理的孢子萌发率。计算孢子萌发抑制掣11J。 1．4．3茵丝生长抑制测定 将培养好的供试菌与适量培养基充分混匀，倒入9cm培养皿中制成带菌平板，每个平 圈直径。 1．4．4温室盆栽防治效果测定 内，每盒50苗，在温室内育苗，按0．29／盒追施尿素，共2--3次。试验用药前一天选择 3．5叶期长势一致盆栽稻苗，按序排放，供试验用。先在盆栽植株上喷施供试放线菌发酵 提取物，24h后接种供试的植物病原菌，每个处理4次重复，每重复l盒。在一周后按稻 瘟病的分级标准进行病情调查，按以下公式计算防治效果。 病情指数(％)=[∑(病级叶数×代表级数))，(叶数总数×最高代表级值)】x100 防治效果(％)=【(对照组病情指数．处理组病情指数)／对照组病情指数]x100 2结果与分析 2．1孢子萌发抑制测定结果