人脂肪来源基质细胞原代培养与成脂分化.pdfVIP

酶消化·免疫磁珠分选的策略能够高效率和高纯度地获得人真皮来源的淋巴管内皮细胞． 冻存细胞经解冻后，细胞生长过程与新鲜细胞差异无统计学意义，二者生长曲线相似，两者的 增殖活力及生长能力均无差异，这表明LEEs进行冷冻保存是可行的．目前常用的细胞冻存保护剂有 DMSO、丙二醇及甘油等。不同组织，甚至不同来源的细胞，最佳的冻存剂及降温速率均不相同． 0．5h， -20(2 2h，一80℃过夜梯度降温．遂置入液氦(．196℃)长期保存．细胞复苏遵循快速融化手段，37C 展生长过程及形态与新鲜取材的内皮细胞相一致，细胞表面抗原标志及调亡率亦无显著性差异、我 们对LECs冻存的研究表明，存储时间对内皮细胞生物学特性无明显影响，取得良好冻存效果的关键 是冻存细胞所用的保存液及降温的速率。我们的研究结果与之相似。冻存14d与冻存6m的内皮细胞， 复苏后活性无明显差异．为满足淋巴管系统发育和新生机制研究实验需要，提供了稳定方便的种子 来源． 总之，我们采用酶消化．免疫磁珠分选的策略能够获得高纯度人真皮来源的淋巴管内皮细胞；冻 存内皮细胞体外培养扩增后，仍能继续保持其生物学特性，可随时为淋巴系统相关研究提供需要的 种子细胞。 人脂肪来源基质细胞原代培养和成脂分化 。 刘丽忠任茂文黄凯 南昌大学一附院(330006) 摘要 目的：探讨分离培养人脂肪基质细胞，研究其体外成脂分化潜能。方法：将人体腹部皮 下脂肪经过胶原酶消化后获得脂肪来源基质细胞，利用含地塞米松l心d、胰岛素10州、IBMX 0．5mM的成脂分化诱导培养基分别诱导第3、第11代和第3代冻存3个月、6个月后的细胞，于诱 成的鉴定。结果：脂肪来源基质细胞呈成纤维样贴壁生长，可扩增至15代而无明显衰老表现，具有 体外持续增值和成脂分化潜能，诱导后细胞体积增大，形态变圆，胞浆内形成大量脂肪滴。第3、 11代和冻存后细胞在成脂分化过程和结果上相似．保持了其成脂分化潜能。结论：脂肪基质细胞可 体外持续大量扩增，其传代细胞和冻存细胞保持了增殖和成脂分化潜能。 脂肪组织含有大量成熟脂肪细胞，还有小血管和结缔组织基质．将脂肪组织机械切割和酶消化 tissue-derivedstromal 后可以获得脂肪基质细胞，称之为脂肪组织来源基质细胞(adipose cells， ADSCs)，其中存在一群成体干细胞，近年来的研究证实这些细胞具有向成骨细胞，软骨细胞，脂肪 细胞，神经元分化的潜能，有希望成为组织工程种子细胞的又一来源．本实验主要探讨ADSCs的分 ～295～ 离培养和脂肪分化潜能。 1材料和方法 I．I主要材料与仪器 I型胶原酶、地塞米松、胰岛素、I-甲基．3一异丁基．黄嘌呤(IBIVlX)，以上 (Forma)．低温高速离心机(Sigma)，倒置显微镜(NLkon IX-71)，扫描电子显微镜(日立S-350) 1．2．1 ADSCs的分离与培养脂肪组织来源于病人整形手术后腹部皮下脂肪，无菌移至超净台。用 的小血管和白色结缔组织，眼科剪剪碎为约IxlxlIllrn3大小，移入离心管内，加入2倍体积的I型 心8分钟．倒去上层脂肪层。重悬后200目滤网过滤，滤液重复离，C,--次，留沉淀以完全培养基 红细胞随换液减少至消失。定期光镜下观察细胞．直至原代细胞生长至接近融合。 1，2．2ADSCs的传代培养和扫描电镜观察原代细胞生长至近90％时，0。25％胰酶消化后分瓶培养， 记为Pl，持续进行传代培养观察增殖传代潜能。取第3代生长状态良好的细胞消化后以lO铀细胞 浓度接种于24孔板内，孔底放置PGA类有机高分子膜(南昌大学材料学院馈赠)，完全培养基培养 3天后送南昌大学电镜室行扫描电镜观察。 1．2．3ADSCs的冻存与复苏取第3代细胞，0．25％胰酶消化后离心洗涤取沉淀．用配制好的冻存 冻存于液氮中．复苏时3TC水浴快速溶化，不含血清培