水稻杂交组合的ISSR比较的研究.pdfVIP

科技创瓤 开拓未来卅005每湖南师范大学第一届青年辩技论坛 水稻杂交组合的ISSR比较研究① 黄光文 陈觉粱 陈良碧 (湖南师范大学生命科学学院) 62．1％。这些条带可以构建起各个材料的分予指纹，从而将所有供试材料区另唾开采。相对其他DNA分子指 纹技术而言。ISSR操作简单、稳定性好、检测方便、多态性高，是一种较理想的鉴定杂交组合的分子指纹方法。 关键谲杂交拳ff6；ISSR；分子稳纹 建立一套麓使、快捷、经济、准确鹅晶种鉴定袭纯度分析检测技术体系是规范释子市场和 促进我阴种子产业参与国际竞争的迫切需要。我国的品种和纯度鉴定主要有形态鉴定法、物 理化学鉴定法、幼苗鉴定法、田阅小区种植鉴定法、酯酶同工酶电泳、蛋白质电泳等，这些方法 均存在这样或那样的不足¨j。近二十年来发展起来的DNA的多态性，被广泛用于筛选品种的 分子标记，以及构建识别作物品种的分子指纹陶谱。DNA指纹图谱对整个基因组的代表性明 显，可稔测到单个位点突变，灵敏度极商，具有品种特舜性，舂援提供与目标性状有关的DNA 水平的信息，避免了环境干扰。通过DNA指纹的比较珂以方便地提供分子水平的直接证据， 有利于晶种或材料获得专利保护，因此是强前最先进静遗传标记系统，是品种真伪和缝度鉴定 的理想方法Uzl。 ISSR(Inter—SimpleSequence 用子檀物研究中133。其中在水稻谚}究领域，已有应用予遗传多态性分析H。。|、基因定位¨¨、 培援显种，认为霹以在亲缘关系较近的鼹种闻检测遗传差异，评份不溺品种阊的异旋性¨引。 但还没有见到运用该技术用于晶种和种子纯度鉴定方面的报道。本文用ISSR对湖南省农业 厅种子管理站2005年安排的省区试杂交稻新组合及其对照材料进行分子指纹图谱的初步分 析，力图构建这魑杂交稻新组合特异性分子指纹图谱，为这些新组合申请品种保护以及纯度鉴 定提供技术支持。 1材料与方法 1．1 水稻材料 湖南省农业厅种子管理站2005年续试早籼杂交组合18份(表l，序号为管理站原编号)。 ①撩金项目：翻家863计划(编号：200AA221001—19) 1髓 kaituo 一、，kejichuongxi_nweilai．一t?一 “一．、t薹 其中l一7号为早熟型，23-28弩和35—39号为迟熟燮组合。 袭1参试杂交缝会 1 1 Table8 combinations Hybrid 1．2 DNA提取 SDS法抽提总DNA，方法按文献‘蜡1有改进。 1．3指纹构建 l。3．1 孳{物 2)用予实验。 囊2 ISSR弓i物表 Table2 and ofFourISSR SequencesAnealingTemperature primers 1．3．2扩增方法 ‘ 反应体系：10×Buffer2．5 mMdNTPO．5 ttL，25raMMgCl22。5啦，10 pL，50秘麓萼|狻l箨L， DNA oC预变性5 DNA模板∞一妁ng，Taqpolymerase2U，总体积25ttL。扩鞴程謦为：95min， oCl 接着以94 min、52℃一6l℃(退火湿度见表2)70S、72℃2min循环39次，最后72℃延伴 10 min。扩增设