用蛋白质芯片飞行质谱技术检测体外培养的肝癌细胞株和转染HBV的肝癌细胞株蛋白质的差异表达.pdfVIP

用蚤白质芯片飞行质谱技术检测体外培养的肝癌细胞株 与转染HBV的肝癌细胞株蛋白质的差异表达 丁守怡”，钱冬萌，闰志勇，宋旭霞，牟文风，王斌 (青岛大学医学院微生物教聊f室，山东青岛266021) 细胞株(HepG2．2．I5)蛋白质的差异表达，从而为进一步研究肝癌的发病机制奠定基础。方法：常规培 HepG2．2．15蛋白质组学的差异。结果：体外培养的HepG2与HepG2．2．15的蛋白质存在差异表达，共有 19个蛋白表达量发生变化。结论：SELDI蛋白芯片技术检测肝癌细胞株与转染乙肝病毒的肝癌细胞株蛋 白质的差异表达方法简便，敏感性高，重复性好，本文发现的这些组织特异性蛋白生物标记对肝癌的早 期诊断有潜在的应用价值对我们从血清或组织标本中筛选和鉴定不同型别肝癌细胞之间的标志蛋白有重 要意义。 [关键词]SELDI蛋白质芯片；肝癌细胞株；蛋白表达 肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居第二。且确诊时已属晚期，缺乏有效的治疗，因此， 需要探索一种快速、简单、灵敏度高、特异性好的早划诊断技术。任何疾病在出现病理变化之前，细胞 内的蛋白质在成分和数最上都会有相应的改变，癌症的发生是一个多基因多阶段多冈子的动力学过程。 在基冈水平，但是mRNA的水平并不能真正代表所表达的蛋白质水平，因此，要求对生物功能的执行者 J。 ——蛋白质进行研究。蛋白质组是指一个基因组、一个细胞或组织或一种生物体所表达的全部蛋向质11 SELDI蛋 蛋白质组学(pmteomics)技术为研究肿瘤标志物与肿瘤进展转移研究提供良好的技术平台， 白质芯片技术是近年来新兴的一种蛋白质组学技术，它具有简单，快捷，灵敏等特点，可以检测膨500～ 养的两种细胞(HepG2、HepG 癌细胞的蛋向表达图谱，发现了一系列(信噪比)差异表达的蛋白，信号强度与蛋白浓度相一致，因此 能对样本中的单一成份进行定量。 1材料和方法 1．1材料 2．2．1 5)由第四军医大学吴力克主任医师赠 肝癌细胞株(HepG2)、转染HBV的肝癌细胞株(HepG 送；HPLC水，乙晴，三氟乙酸，SPA(sinapinic 析物表面的正电荷基团相互作用(如赖氨酸、精氮酸和组氨酸)而捕获蛋白。 T．2方法 1．2．1 2．2．15细胞采川含100mL／L腑牛血清的RPMI1640培养 细胞总蛋白质的提取HepG2、HepG Tris—HCI rain，14000 rain。 Urea，409／LCHAPS，40mmoI／L r，min离心30 pH7．4)200pL，4℃剧烈震荡30 采用日立的Gene V蛋白核酸分析系统测定上清的蛋白浓度，川裂解液调至样品浓度为2叽，分装 Spec 作者简介：j守怡，女，山东青岛人，汉族．赢级实验师。主要从事细胞与分了生物学研究 0 通讯作肖：一J1斌，青岛人学医学院微生物教研室，Ih东省青岛市黉州路38 304 NaAc， min，弃缓冲液，重复上述操作1次。每孔加入1：2稀释的 pH4．0)预处理芯片，室温下200“min振荡5 h。弃掉样品，每孔片j