一种引起肉仔鸡免疫与生长抑制病的新病毒的初步鉴定.pdfVIP

兽医部分 689 一种引起肉仔鸡免疫和生长抑制病的新病毒的初步鉴定+ 刘兴友m 王献文1 刘应鹏2李雪华2江倩2胡建和1 航柏林1 姚四新1 唐桂芬3 王艳玲2 (1．河南科技学院河南新乡市4530032．河南农业大学郑州市450002 3．郑州牧业工程高等专科学校郑州450011) 摘要：从发生免疫和生长抑制病的肉仔鸡中分离到了一种新的病毒，对其生长特性、理化特性、形态特性和核酸类型 等方面进行了初步鉴定。该病毒粒子呈不规则的六边形，近似圆形或椭圆形，直径40—70nm。病毒核酸为双链RNA。能够 4— 纤维细胞(cEF)上生长。该病毒对20％乙醚有较强的耐受性，对4．8％氯仿有一定的耐受性，病毒无囊膜脂质。在pH 10范围内37℃2h病毒能完全耐受，pHll．O37℃2h病毒能完全灭活；在60℃下30rain病毒完全灭活。 关键词：鸡；免疫抑制病毒；生长抑制病毒；病毒特性。 鸡免疫和生长抑制病病毒是近年来严重危害养鸡业的一种疾病。我们从发生免疫和生长抑制病的 肉仔鸡中分离到了一种新的病毒‘1。，对其生长特性、理化特性、核酸类型、形态特特征等方面进行了初步 研究，报道如下。 1材料与方法 1．1 材料 1。1。1病毒鸡免疫和生长抑制病病毒分离自发病三黄肉仔鸡，冻干保存，传代次数为第5代(编号为 ISSV5)。禽痘病毒由河南农业大学微生物实验室惠赠，为鸡胚成纤维细胞培养的病毒。 1．1．2 为实验用SPF鸡胚。 校实验研究中心惠赠。鸡胚成纤维细胞为自制。 1．1．4兔抗lSSV5血清为本实验室自制，鸡胚中和效价为1：104。 1．1．5羊抗兔免疫荧光抗体购自河南华美公司，批号为ZF一0311，规格为100p．1。 1．2方法 5枚，37。C孵化培养。记录死亡胚数，弃去24h内死亡胚，直至18日龄，观察鸡胚病变及矮化数量。孵化过 程中死亡鸡胚，出现矮化，毛无光泽、稀短、紧裹在胚体表面不易剥离，胚体蜷曲呈“抱头”状的鸡胚，均判 定为感染病毒鸡胚。采用Reed—Muench法，计算EIDso。 号) ··通讯作者：刘兴友，男，博士，教授。主要研究方向为动物病毒分子生物学及免疫防治。 2006学术年会 1．2．2病毒生长特性测定 肝脏、肾脏和小肠组织。每个鸡胚尿囊液进行间接ELISA检测，各器官组织用间接免疫荧光检查和醋酸 双氧铀和柠檬酸铅双重染色透射电镜检查。48h尿囊液用负染电镜检查。 (CPE)，到有80％的细胞发生病变时，冻收。若无细胞病变(CPE)出现，则进行连续盲传三代，然后冻收。 将收集的细胞培养物反复冻融3次，3000r／rain离心20min，取上清，一20℃保存备用。 病毒感染鸡胚成纤维细胞(CEF)试验：参照文献[2]的方法制备原代鸡胚成纤维细胞，置37。C含5％ C02培养箱中进行培养。待细胞基本上长满单层后传代一次供用。然后取生长良好的基本上长满单层的 CEF4瓶，其中3瓶接种经无菌处理的病毒，设空白对照l瓶，按上述方法培养，连续盲传三代，冻收。将收 集的细胞培养物反复冻融3次，3000dmin离心20min，取上清，一20℃保存备用。 细胞培养物中病毒活性的检查：用上述盲传三代的Veto细胞培养物、PKl5细胞和鸡胚成纤维细胞培 养物，分别经尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚，各10枚，0．2mL／枚。同时接种同剂量生理盐水的对照胚 10枚。同前法进行孵化，观察鸡胚变化。 度。把10日龄SPF鸡胚随机分为4组，第1、2组分别接种用生理盐水和药物液稀释的病毒，每个稀释度 对数，则为FUDR对该病毒无明显抑制作用，即为RNA病毒。 1．2．4病毒理化特性的测定 1．2．4．1 24h，其问不时充分振荡，4℃2 Em∞，同时设病毒对照。 1．2．4．2 4。C冰箱中充分振荡混合20min，然后经2 定其ED∞，同时设病毒对照。 后接种10 Et龄SPF鸡胚，每管接种8枚，0．2mL／枚，37。C孵化，观察鸡胚死亡、病