大黄素通过抑制ATP和拓扑异构酶II的结合导致DNA产生双链断裂.pdfVIP

大黄素通过抑制 ATP 与拓扑异构酶 II 的结 合导致 DNA 产生双链断裂 李妍，栾洋，任进 （药物安全评价研究中心，上海药物研究所，中国科学院，201203 ） 摘要： 目的：大黄素作为泻药中常见的一种成分，广泛应用于临床，近期研究表明它能够引起遗传 毒性，但是机制尚不清楚。为了探讨大黄素引起遗传毒性的机制，我们开展了一系列的研究。 方法：采用 Ames 试验，TK 基因突变试验以及体内和体外的微核试验来评价大黄素的遗传 毒性。在研究大黄素与拓扑异构酶的相互作用时，进行了一系列的分子和细胞水平的实验， 研究了大黄素对拓扑异构酶 II (topoisomerase II, Topo II) 活性以及 Topo II α-DNA 可切割复 合物的影响。另外，我们还应用了计算机模拟分子对接技术来预测大黄素与 Topo II 的相互 作用位点。最后，通过同位素标记技术和核磁共振技术（Nuclear Magnetic Resonance, NMR) 验证模拟结果并检测了大黄素对 Topo II 介导的 ATP 水解的影响。 结果：TK 基因突变试验和体外微核试验表明，在非代谢活化的条件下，80 µg/mL 的大黄素 具有弱的遗传毒性。但是中性彗星试验和磷酸化的 H2AX 的表达上调表明，大黄素能够引 起 DNA 的双链断裂。而且，在非细胞体系中，大黄素能够抑制Topo II α介导的 pBR322 的 解螺旋和 kDNA 的去连环，表明大黄素能够抑制Topo II 的活性。Topo II 催化抑制剂阿克拉 霉素能够保护大黄素对 TK6 细胞引起的 DNA 双链断裂的损伤作用，同样的结果也显现在 Topo II 缺陷型 HL-60/MX2 细胞中。实验表明大黄素能够通过与 ATP 竞争结合至 Topo II 的 ATP 结构域，并能抑制 ATP 的水解来影响Topo II 的活性。 结论：试验结果表明，大黄素能够抑制 ATP 结合至 Topo II，从而影响 Topo II 的活性，导致 DNA 双链断裂。 关键词：大黄素、DNA 双链断裂、拓扑异构酶、ATP Emodin inhibited ATP binding to Topoisomerase II to induce DNA double-strand breaks Li Yan, Luan Yang, Ren Jin (Center for Drug Safety Evaluation and Research, Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Sciences) Abstract OBJECTIVE: Emodin has been widely used as a component of laxatives, whereas it can lead to genotoxicity. However, the mechanism underlining its genotoxicity is not entirely clear. We applied different assays to investigate the mechanisms by which emodin induces genotoxicity. METHODS: Ames assay, thymidine kinase (TK) gene mutation assay and in vitro and in vivo micronucleus (MN) test were used to evaluate genotoxicity caused by emodin. A series of standard biochemical and cellular methods were applied to investig