晚期内皮祖细胞复合聚己内酯／壳聚糖电纺丝纳米纤维支架构建小口径组织工程血管实验研究.pdfVIP

第六届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会 一幺功∥ 暨第三届中华医学会医学工程学分会干细胞工程专业委员会年会汇编 晚期内皮祖细胞复合聚己内酯／壳聚糖电纺丝纳米纤维 支架构建小口径组织工程血管的实验研究 乔威周敏刘昭刘长建 南．荩大警医等院尉属敲禳医J兔血譬升种 摘要 心血管疾病发病率逐年增高，目前是威胁人类生命的主要疾患之一。血管移植转流手术是 临床治疗心血管疾病的常用手段。目前最理想的血管代用品仍是自体血管，但是因常难以获取 合适的血管，临床应用受到限制往往存在缺乏合适的自体血管的情况，而临床常用的Dacron和 ePTFE人工血管虽然在高流速低阻力情况下(如大口径周围动脉)应用效果满意，但是在应用 于小口径血管(6ram)移植时，往往会因血栓形成，内膜过度增生及感染等因素导致远期通 畅率差，临床应用结果很难令人失望。近些年来，血管组织工程学的研究为解决上述难题提供 了新的途径。组织工程血管构建主要包括：种子细胞，血管支架构建，体外培养构建环境。近 年来，内皮祖细胞因具有强大的增殖潜能，具有稳定的表型和功能，可分化为内皮细胞，作为 理想的种子细胞已广泛应用于组织工程血管构建；以天然生物材料和人工合成生物构建复合血 管支架因可提高支架材料的生物力学性能及生物相容性也已成为研究热点，而电纺丝技术能方 便地构建模拟细胞外基质形态结构的纳米纤维支架在血管支架构建方面应用也越来越广；体外 培养环境可促进细胞粘附增殖生长促进组织工程血管重塑成熟，以模拟体内生理环境为目的的 生物反应器的研究对于体外构建组织工程血管意义重大。本研究经外周血分离获取内皮祖细胞 作为构建组织工程血管的种子细胞，利用电纺丝技术制备复合聚己内酯／壳聚糖纳米纤维血管支 架，在体外将内皮祖细胞和聚己内酯／壳聚糖纳米纤维血管支架复合进行动态培养构建组织工程 血管再移植到兔体内进行动物实验评估及各项性能，尝试构建一种全新的组织工程血管。全文 分为四个部分： 第一部分外周血内皮祖细胞的分离、培养及鉴定 目的：建立经外周血分离内皮祖细胞(EPCs)并进行体外培养和鉴定的方法，选择合适的 EPCs作为种子细胞用于体外构建组织工程血管。 方法：经外周静脉或经兔心穿刺获取外周血，应用密度梯度离心法获取外周血单核细胞， 在体外进行诱导培养获取内皮祖细胞。在体外培养过程中，可获取早期内皮祖细胞和晚期内皮 祖细胞，对其生长形态、增殖潜能、细胞表型、蛋白表达、血管形成能力、生长因子分泌情况 及一氧化氮释放情况进行了鉴定，比较了两类细胞的不同特性，以选择合适的内皮祖细胞用于 组织工程血管构建。 结果：早期和晚期内皮祖细胞均来源于单核细胞，但它们具有不同的特性。发现人早期内 皮祖细胞为纺锤状细胞，在培养的4．7天出现，生长寿命短，增殖能力弱，而晚期内皮祖细胞呈 卵圆形外观，在培养的2．3周内出现，具有强大的增殖能力；在细胞表型方面早期内皮祖细胞表 现为造血干细胞．单核细胞表型，而晚期内皮祖细胞更类似于内皮细胞表型；晚期内皮祖细胞可 一62— 第六届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会 暨第三届中华医学会医学工程学分会干细胞工程专业委员会年会汇编 在Matrigel上形成毛细血管网状结构而早期内皮祖细胞则不能，虽然早期内皮祖细胞可分泌更 多的血管源性生长因子(IL．8．VEGF及G-CSF)。此外，两类内皮祖细胞均表达内皮一氧化氮合 酶，且可以释放一氧化氮。对于兔外周血内皮祖细胞的研究也有类似结果。 结论：1．密度梯度离心法分离分离外周血单核细胞进行体外诱导培养可获取两类内皮祖细 胞即早期内皮祖细胞和晚期内皮祖细胞；2．外周血晚期内皮祖细胞具有强大增殖能力，稳定细 胞表犁和类似内皮细胞的功能特性，并可分化为内皮细胞可作为理想的种子细胞来源用于组织 工程血管构建。 第