土拉杆菌capBCA基因群致病机制研究.pdfVIP

作为鼠疫抗体检测中的细胞性诊断抗原，以期解决常 试验。 规制备的Fl抗原不纯，存在交叉反应的问题m。理论 参考文献 上，鼠疫杆菌F1抗原为原核表达抗原，而原核基因 在真核细胞中的表达存在翻译后修饰的现象，可能会 [I]石丽嫒，王鹏．唐雪，等．对常规制备的鼠疫F1抗原、抗体组分及免 引起抗原性改变。经本研究证实真核表达的Fl抗原 疫交叉反应的观藕儿中国地方病学杂志，2006。25(6)．598-600． 与F1抗体反应良好，与刘剧…等的结论相似，可能是 【2]刘斌，郑文岭．邓海，等鼠疫耶耳森氏菌FI抗原在酿酒酵母中的表 翻译后的修饰未累及F1抗原的表位的缘故。另外， 迭及鉴定[J】细胞与分子免疫学杂志。2005，21(4)：425-427． 本研究所使用的二抗均为荧光素标记的抗IgG类抗 体，故所检测的F1抗体均为IgG类，后续将进行IgM 类抗体的检测及更广泛的鼠疫阳性血清为一抗的验证 土拉杆菌eapBCA基因群的致病机制研究 苏敬良1，Jing-Renzhan92 (1．中国农业大学动物医学院北京100193；2．‰h 杆菌对人具有高度的传染性，可从动物传染给人，对人具有很高的致病性，并可能被用作生物武器，因此被美国政府列为A类病 原菌。我们的前期研究利用信号标记转座子诱变技术(Signature—tagged 荚膜合成基因具有很高的同源性。炭疽杆菌的荚膜成分为1—谷氨酰胺多肽组成，是炭疽杆菌的主要毒力因子之。本研究就土拉杆 殖显著降低，对小鼠的半数致死量降低了10，000以上。免疫保护试验证明，经呼吸道接种免疫缺失株对野毒感染有100％的免疫 保护作用。基因缺失可以在一定程度上影响突变株在巨噬细胞中的繁殖．但可能不是其毒力致弱的主要原因。 多种途径感染，因此可能被用作生物武器。第二次世 1 引言 界大战期间，侵华日军的生物武器部队曾对中国公民 土拉杆菌为革兰氏阴性球杆菌，主要在宿主细胞 使用过该菌；前苏联在对德国的战场上也使用过该菌。 内繁殖。该菌可感染人和200多种哺乳动物，引起土拉 美国“9．11”事件后，该细菌被列为A类病原菌。1986 杆菌病。土拉杆菌分为4个亚种：tularensis亚种(亦称年我国山东某兔肉加工厂曾发生过31个工人感染的报 A型)，holarctica亚种(亦称B型)，mediasiatiea亚种和道。近年来在我国部分地区仍不时有病例报道， novicida：昕种。其中人的土拉杆菌病大多数是由前2个在我们的前期研究中，利用转座子诱变及动物感 亚种引起，尤其是A型，对人具有极高的传染性和致 染试验，在capBCA基因群中成功地筛选出多个基因插 病性，呼吸道感染约to+活菌即可引起感染，感染后 入突变株，体内和体外试验表明，这些突变株被显著 如不进行及时治疗，致死率可超过30％。本菌可通过 地致弱，但该基因群在该菌致病过程中如何发挥作用， 气溶胶、接触污染动物尸体、食用被污染的食物和饮 水、以及吸血昆虫叮咬等途径感染。临床上可表现为 共转录，这些基因对细菌感染巨噬细胞及在动物靶器 腺溃疡型、咽喉型、伤寒型及肺型土拉杆菌病。由于 官中繁殖起着重要作用。 该菌对人具有极高的传染性和高致病性，并且可通过 2材料与方法 表达后，采用亲和层析柱纯化GST—CapB融合蛋白。将 2，1 茵株培养及试剂 纯化的融合蛋白与等量铝胶佐剂混合后。经皮下接种 土拉杆菌LVS株及突变株均采用改良巧克力琼脂 免疫5只6—8周龄雌性SPFBALB／ed、鼠，间隔2周免疫3 平板或MH肉汤培养基培养，根据需要添加卡那霉素 次后，取血清进行免疫印迹测定血清效价。 (10斗s／mE)或hygromyein(200p．g／mL)。大肠杆