毕业设计（论文）-鲤科鱼类DNA的提取与扩增.docVIP

武汉轻工大学 毕业论文 毕业论文题目 鲤科鱼类DNA的提取与扩增 姓 名 学 号 090214408 院（系） 生物与制药工程学院 专 业 生 物 科 学 指导教师 2013年6月8日 目录 摘要 1 1.前言 3 1.1 DNA的提取方法 3 1.1.1浓盐法 3 1.1.2阴离子去污剂法 4 1.1.3苯酚抽提法 4 1.1.4 Chelex-100提取法 4 1.1.5磁珠提取法 4 1.2 DNA的检测方法 5 1.2.1 DNA的琼脂糖凝胶电泳 5 1.3 PCR技术 5 1.4鲤科鱼类简介 8 1.4.1常见的鲤科鱼类 8 2.材料与方法 10 2.1材料 10 2.2实验仪器 10 2.3 主要试剂 10 2.4 实验方法 11 2.4.1苯酚/氯仿法提取基因组DNA 11 2.4.2 试剂盒法 11 2.5 DNA的PCR扩增及电泳 13 3．结果 14 3.1样品DNA的提取 14 3.2样品mtDNA D-loop序列的扩增 14 4.讨论 15 谢辞 17 参考文献 18 摘要 本文采用标准的酚/氯仿法和试剂盒法提取鲤科鱼类翘嘴鲌的基因组DNA，并对鱼样线粒体DNA控制区进行了扩增。结果表明，酚/氯仿法和试剂盒法提取鲤科鱼类翘嘴鲌的基因组DNA，经凝胶电泳检测所提取样品DNA条带清晰，两种方法所提鱼样基因组DNA质量较好。采用所提取样品DNA对鱼样线粒体DNA控制区进行了扩增，结果表明，基因组DNA可扩增出清晰可辨的条带，重复性好。 关键词： DNA提取技术； PCR技术； 鲤科鱼类 Abstract The genomic DNA of Culter alburnus was extracted by using the standard phenol/chloroform extraction method and assay kits and the mitochondrial DNA controlled regions of fish samples were amplified.After Gel electrophoresis,the results showed that the bands of genomic DNA of Culter alburnus were clear, and the quality of genomic DNA of those sample showed better by using the two extraction methods.Using the mitochondrial DNA controlled regions of fish sample for amplification, and the results also showed that the mitochondrial DNA controlled regions of the samples were amplified and the bands amplified were legible and reproducible. Key words: DNA Extraction Technique; PCR Technique; Cyprinids 1.前言 1.1 DNA的提取方法 DNA是大分子高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度。DNA对紫外线有吸收作用，当核酸变性时，吸光值升高；当变性核酸可复性时，吸光值又会恢复到原来水平。温度、有机溶剂、酸碱度、尿素、酰胺等试剂都可以引起DNA分子变性，即使得DNA双键间的氢键断裂，双螺旋结构解开。NA修复（DNA repairing）是细胞对DNA受损伤后的一种反应，这种反应可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能；但有时并非能完全消除DNA的损伤，只是使细胞能够耐受这DNA的损伤而能继续生存。也许这未能完全修复而存留下来的损伤会在适合的条件下显示出来（如细胞的癌变等），但如果细胞不具备这修复功能，就无法对付经常在发生的DNA损伤事件，就不能生存。所以研究DNA修复也是探索生命的一个重要方面，而且与军事医学、肿瘤学等密切相关。对不同的DNA损伤，细胞可以有不同的修复反应。 1.1.1浓盐法 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来也可用0.15M Nacl液反复洗涤细胞破碎液除去RNP