羊痘病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立.pdfVIP

第 3O卷第 5期 江 西 农 业 大 学 学 报 Vo1．30，No．5 2008年 lO月 ActaAgrieulturaeUniversitatisJiangxiensis Oct．，2008 文章编号：1000—2286(2008)05—0860—05 羊痘病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 吴国华 ，张 强h，颜新敏 ，李 健 ，朱海霞 ，邵长春 ，邬向东 (1．中国农业科学院 兰州兽医研究所／家畜疫病病原生物学国家重点实验室／农业部畜禽病毒学重点开放实验室 ， 甘肃 兰州 730046；2．江西农业大学 动物科学技术学院，江西 南昌 330045) 摘要：用纯化的山羊痘病毒分别免疫家兔和豚鼠，制备高效价的抗血清。经方阵滴定测定捕获抗体、检测抗体、 酶结合物和标准抗原的稀释倍数。通过对阴性样品的检测，确定阴阳性的判定标准，初步建立羊痘病毒间接夹 心 ELISA诊断方法。用建立的ELISA方法对31份已知背景样品进行检测，总符合率为93．5％。经特异性试 验、批内重复试验和对比试验，说明建立的夹心ELISA诊断方法具有 良好的特异性、重复性和敏感性。对田间 样品的检测表明，该ELISA诊断方法可应用于对羊痘的鉴别诊断。 关键词：羊痘病毒；夹心EHSA；诊断 中图分类号：$852．654 文献标识码：A DevelopmentofDoubleAntibodySandwichELISA forDeteetionofCapripoxvirus WUGuo—hua，ZHANGQiang ，YANXin—min， LIJian ，ZHU Hai—xia，SHAOChang—chun ，WUXiang—dong (1．KeyLaboratoryofAnimalVirologyofMinistryofAgriculture，StateKeyLaboratoryofVeterinaryEtio— logicalBiology，LanzhouVeterinaryResearch Institute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Lanzhou 730046，China；2．CollegeofAnimalScienceandTechnology，JAU，Nanchang330405，China) Abstract：Theantiseraagainstpurifiedgoatpoxviruswereobatinedfromrabbitsandguineapigs．Th e0p· timal dilutionofantiseraandantigenweredeterminedbytitrationtest．Aftertheestablishmentofdoubleanti— bodysandwichELISA．31samplesweredetected．Th eresultsshowedhtatthecoincidenceratewas93．5％ ． Itwasprovedhtathtemethodhadgoodspecificity ，repeatabilityandsensitivity．Detectionoffieldsamples suggestedthathteesatblishedELISA couldbeusedtodetectcapripoxvirus． Keywords：capripoxvirus；sandwichELISA；diagnosis 羊痘(capripox)又名羊 “天花”，是由羊痘病毒 (capripoxvirus)引起的一种急性、热性、接触性传染 病，是所有动物痘病中最为严重的一种，具有较高的死亡率，有时死亡率高达 100％IX]。羊痘被世界动 物卫生组织 (OIE)列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病，本病的发生易造成巨大经济 收稿 日期 ：2008—05—12 修回日期：2008—09—12 基金项 目：国家重点基础研究发展计划 (973)项 目(2005CB523201)和国家基础平台项 目(2005DKA21205—3) 作者简介：吴国华(1977一)，男，助理研究员，博士生 ，主要从事动物病毒分子免疫学方向研究，E—ma