电脉冲刺激家兔肾旁穴丘脑雌二醇受体的表达变化.pdfVIP

电脉冲刺激家兔肾旁穴丘脑雌二醇受体的表达变化+ 范光丽1杨国林2郑小敏1张国伟2 陈正礼1张曼1牛建荣2郎子文2 (1西北农林科技大学动物科技学院陕西橱凌712100：2．q懒dk科学院兰州膏牧与兽药研究所) 摘要：为探讨电脉冲刺激肾旁穴能够调控生殖内分泌功能的作用机制，用经穴诊断治疗仪电脉冲 刺激兔肾旁穴，用免疫组织化学SP法，观察了丘脑雌二醇受体免疫反应阳性产物(ER-IR)的分布变化。 结果发现，针刺组兔丘脑中的丘脑腹主核、丘脑腹外侧核出现大量ER免疫反应阳性神经元，染色深，突 起明显，细胞形态多样，轮廓清晰，分布较密集；丘脑中央旁核、丘脑网状核中有大量ER免疫反应阳性 神经细胞核、神经纤维及神经终末。对照组相应神经核团中ER-IR明显少于实验组，染色浅，突起不明 显，形态单一或轮廓不清。以上结果提示，电脉冲刺激肾旁穴可引起丘脑内雌二醇受体增加，神经内分 泌活动增强，可引起多种脑功能活动增强。 关键词：肾旁穴；电脉冲：丘脑；雌二醇受体；兔 现代中医研究表明，针灸刺激某些穴位可以改变体内雌激素水平，对雌性生殖内分泌 功能有调节作用Ⅲ，郎子文等闭作过“针刺腧穴对母牛生殖内分泌功能的调控”的研究， 进一步证实针刺腧穴可促使卵泡发育、排卵和受胎，从而有效的提高奶牛受胎率，但尚缺 乏形态学资料。在我们用电脉冲刺激肾旁穴对下丘脑生殖调控的研究中，发现电脉冲刺激 肾旁穴时，间脑中一些核团在针刺前后免疫反应阳性产物也发生了相应的变化，这一变化 的意义如何，有待深入探讨，进而为针刺肾旁穴促进中枢神经调控机制提供充分的形态学 依据。 1材料与方法 1．1实验动物 8只发育正常的，处于发情期的青年雌兔。 1．2实验方法 1．2．1取穴及针刺方法 选取肾旁穴：以百会穴为标志，从百会穴正旁向外侧触摸，在百会与肠骨外角最高点 之问略少于l，2处的臀中肌上有一条肌沟，顺此肌沟向后触摸到臀中肌与股二头肌交界处 有一凹陷，该凹陷即为肾旁穴。将兔随机分为两组：针刺组(电脉冲组)与对照组各4只， 针刺组用由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所研制的XXH-HA型经穴治疗仪．将探 }项目来源：国家自然科学基金资助项目 作者简介：范光丽(1943一)，西北农林科技大学教授，博士生导师，主要从事基础兽医学研究 方向。E-mail：guanglifan@yahoo，COEILcn ·354· 头按于穴区测记部位，诊疗仪自动巡回检测，现出低阻敏感点，电子开关将脉冲控制在低 阻点上，通过电极直接进行电脉冲刺激，刺激强度以动物剧烈骚动为宜，刺激时间30min， 对照组同电针组在相同条件下进行模拟刺激实验，不进行电针刺激。 1．2．2动物组织切片准备 刺激后80min，两组兔均保定，打开胸腔，暴露心脏，经主动脉灌注生理盐水500ml， 继而灌注4C的4％的聚甲醛(用量同生理盐水)，取脑入固定液，固定5～10h，再移人含 20％蔗糖的PB液中。取脑做连续冠状冰冻切片，片厚33tm，每隔3张连续取2张，切片 人O．0lmoFL PBS液中。备组切片分为两套，一套用于免疫组织化学染色，另一套部分用 于免疫组化空白对照实验．部分用于尼氏染色。参照ALVINLBERMAN图谱进行核团定 sadvan．ced 位，观察免疫反应产物的分布情况。用Motil 3．0数码医学图象分析系统 Inmage 和捷达801系列形态学分析系统软件进行图象分析。 1．2．3免疫组织化学sP法操作程序瞄’卅 切片在链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒A液中，室温下孵育 lh；B液在室温下孵育50rain人兔抗雌二醇受体单克隆抗体中4℃孵育48～72h，切片放 次，在PBS与0．1％的明胶混合液中贴片，经梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 空白对照组以0．01molILPBS液代替兔抗雌二醇受体单克隆抗体，其它步骤与上述相同。 2结果 2．1雌二醇受体免疫组织化学SP法免疫反应阳性产物 雌二醇受体(E2R)免疫反应阳性产物为蓝色沉淀。显示蓝色沉淀的为FaR免疫反应 阳性产物。根据E2R～瓜阳性神经元蓝色沉淀的颜色深浅。可把E2R一瓜阳性神经元分为 强阳性、中等阳性和弱阳性神经元三种。弱阳性神