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大豆论文:大豆转录因子GmC2H2基因转化拟南芥效果分析
【中文摘要】锌指蛋白(zinc finger protein)是一类具有“指状”结构域的转录因子,主要功能是调控基因的表达,锌指蛋白种类较多,但以C2H2型最多。C2H2型锌指蛋白基因最早在非洲爪蟾中发现,植物中发现的第一个C2H2型锌指蛋白基因是在矮牵牛中分离得到的ZPT2-1,之后陆续在矮牵牛、拟南芥、棉花、大豆、水稻等植物中相继分离到了该类型的锌指蛋白基因,并发现在植物中都含有QALGGH高度保守序列,而动物锌指蛋白中不存在。已有的研究发现C2H2型锌指蛋白主要参与植物的生长发育以及调控植物的抗逆性。本研究的GmC2H2转录因子基因是依据GenBank中大豆EST数据库的保守序列,设计特异性的引物,利用PCR、RT-PCR等技术获得的一个cDNA开放阅读框序列,它是大豆中一个编码经典C2H2型锌指蛋白的基因,并在Genbank中注册,其登陆号为:DQ055134。该基因全长765 bp,开放阅读框长度为516 bp,其编码172个氨基酸的锌指蛋白,分子量约为19KD。在本实验室前期研究的基础上,将GmC2H2基因的全长编码序列分别构建到16318hGFP亚细胞定位载体上,将16318hGFP -Gm...
【英文摘要】Zinc finger protein is a kind of transcription factor that has a finger structural domain, and it can regulate the gene expression. There are various types of zinc finger proteins, but most of them belong to the C2H2-type. C2H2 type zinc finger protein was first discovered in Xenopus tropicalis, and a C2H2 zinc finger protein gene named ZPT2-1 which was isolated from the petunia was first found in plants, and the gene of this type zinc finger protein have gradually been isolated from the petunia, Arabidopsi...
【关键词】大豆 锌指蛋白 GmC2H2 转录因子 转基因拟南芥
【英文关键词】Soybean Zinc finger proein GmC2H2 Transcription factor Transgenic Arabidopsis thalian
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【目录】大豆转录因子GmC2H2基因转化拟南芥效果分析
摘要
6-7
Abstract
7-8
第一章 绪论
16-25
1.1 植物转录因子研究进展
16-17
1.1.1 转录因子
16-17
1.1.2 植物抗逆相关转录因子
17
1.2 植物锌指蛋白的研究进展
17-18
1.2.1 锌指蛋白的结构和分类
17
1.2.2 植物锌指蛋白的功能
17-18
1.3 非生物胁迫下植物的应答机制
18-24
1.3.1 低温胁迫下植物的应答特征
18-19
1.3.2 高盐胁迫下植物的应答特征
19-20
1.3.3 ABA 处理下植物的应答特征
20-22
1.3.4 干旱胁迫下植物的应答特征
22-24
1.4 立题目的意义
24
1.5 技术路线
24-25
第二章 GMC2H2 序列分析及植物载体构建
25-39
2.1 试验材料
25-26
2.1.1 菌种及载体
25
2.1.2 酶及生化试剂
25
2.1.3 试剂盒
25
2.1.4 引物
25
2.1.5 测序
25
2.1.6 培养基的配制
25
2.1.7 主要仪器设备
25-26
2.1.8 引物设计和序列分析软件
26
2.2 超表达载体的构建
26-29
2.2.1 PCR
26
2.2.2 PCR 产物的回收
26-27
2.2.3 连接反应
27
2.2.4 感受态的制备
27
2.2.5 重组质粒的转化
27
2.2.6 质粒DNA 的提取
27-28
2.2.7 酶切检测
28
2.2.8 DNA 序列测定
28
2.2.9 酶切回收
28
2.2.10 连接转化
28
2.2.11 阳性克隆鉴定及测序
28-29
2.3 亚细胞定位表达载体的构建
29
2.3.1 P
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