HPLC-ICP-MS测定硒蛋白中硒代氨基酸的方法.pdfVIP

· 636· 中国卫生检验杂志 2015年3月第25卷第5期 ChinJHealthLabTec，Mar．2015，Vo1．25，No．5 · 化学测定方法 · HPLC—ICP—MS测定硒蛋 白中硒代氨基酸的方法 谢倩 ，李建洪 ，黄文耀 ，闻胜 ，唐琳 ，史廷明 1．华中农业大学植物科学技术学院，湖北 武汉430070；2．湖北省疾病预防控制中心 ，湖北 武汉430079 摘要：目的 建立一种适用于检测硒蛋白中硒代氨基酸的有效方法。方法 硒蛋白样品采用酸脱蛋白质的方法，在酸 性条件下使蛋白质变性沉淀，取沉淀物运用蛋 白酶 K、胰蛋白酶、链蛋白酶酶解硒蛋白样品；在 5mmol／L的柠檬酸铵中 加2％的甲醇溶液作为流动相，并用柠檬酸或氨水精确调节流动相的pH值 (pH=4．9)，用离子交换柱分离硒代半胱氨 酸(SeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)等硒代氨基酸 ，通过 ICP—Ms检测其含量 ，并运用方法学验证实验结果。结果 所建 立的硒蛋白中硒代氨基酸检测方法，检出限分别为3．5 kg、11．2 kg，线性范围(以se计)为0 g／L～200 L， 加标回收率为75％一120％。结论 经实验证明，该检测方法适用于食品营养强化剂硒蛋白中硒代氨基酸的分析 ，此方 法的建立对食品的成分分析和食品的开发利用具有重要意义。 关键词：含硒蛋白；硒代氨基酸；离子交换；高效液相色谱一电感耦合等离子质谱 中图分类号：0657．63 文献标识码 ：A 文章编号：1004—8685(2015)05—0636—04 Determination ofselenoaminoacidsinselenium proteinbyHPLC—-ICP—-M S XIEQian ，LIJian—hong，HUANGWen—yao，WENSheng，TANGLin，SHITing—ming PlantScienceandTechnologyCollege，HuazhangAgriculturalUniversity，Wuhan，Hubei430070，China Abstract：Objective Toestablishamethodwhichissuitablefordetectionofselenoaminoacidinseleniumprotein．Meth- ods Selenium proteinsamples，withthemethodofaciddeproteinization，wasconductedofrproteindenaturation，underacid conditionleadtoproteinprecipitation，sedimentwasseperatedbytakinguseofprotease，trypsin，proteaseK chainselenium proteinenzymolysissample；5mmol／Lammonium citrateand2％ methanolsolutionasmobilephase，usingcitricacidoralnmo— niaprecisetoadjustthemobilephasepHvalue(pH=4．9)，ionexchangecolumnwasusedtoseparateseleniumcysteine(Se— Cys)，se]enome出ionine(seMet)suchasseleniumgenerationaminoacid：ICP—MSwasusedtodetectitscontent，andusethe methodologytovalidateresults．Results Asofrtheestablishedmethod，thedetectionlimitwas3．5 g／kg，11．2 g／kg；Lin— earrangewasinSeof0 g／L一200 g／L；Standardadditionrecovery was75％ 一120％．Conclusion Theexperimenthas provedthatthedetectionmethodiss