慢性HBsAg携带者外周血体外转化树突状细胞表型、功能的变化.pdfVIP

大会发言 B1．慢性HBsAg携带者外周血体外转化树突状 细胞表型、功能的变化 北京大学第一医院感染疾病科(100034) 刘茂昌王贵强朴文花陆海英席宏丽王勤环 DC是目前所发现的功能最大的专职抗原递呈细胞，它是唯一能激活幼稚T细胞的APC，而且它还 能调节T、B细胞的功能，树突状细胞不仅能激发、调节免疫反应，而且还能终止、抑制免疫反应，是 免疫反应的始动者和调节者，在整个免疫反应中处于中枢环节。免疫因素在病毒性乙型肝炎的发病过程 有重要作用。研究发现病毒性乙型肝炎患者体内Dc功能具有缺陷性，不仅表现在表型的不成熟，还存 在着功能的缺陷。如何能够提高DC功能，是应用Dc进行疾病治疗的重要研究方向。 I：c)是一种人工合成的双链核糖核酸，是一种强的I 聚肌胞(Polyinosimc—PolycytidylicAcid。Poly 型和Ⅱ型干扰素(IFN—a印)诱生剂，并有一定的抗病毒作用；此外还有调节机体免疫功能，促进人体 I：C能够活化单核细胞产生CSF、几一垠也一 非特异性免疫功能和某些特异性免疫功能。还发现Poly 观察HBsAg携带者及慢性乙型肝炎病人Dc表型及功能的变化，并进一步探讨慢性aBsAg携带者针对 HBV抗原的免疫状态。 材料和方法 1．病例 十次全国病毒性肝炎及肝病学术会议制定的《病毒性肝炎防治方案》。全部病人经ELISA方法检测HBV 血清学标志，PCR定量检测HBV 疗。所有研究对象均无心、脑、肾及其它器官合并症。正常对照组来自于我院血库献血员，共10例 (表1)，正常对照组中有6例为HBaAb阳性，为接受过HB_v疫苗感染HBV后痊愈，4例HBV血清学标 记及HBVDNA均阴性。 表1 HBV慢性感染者的临床资料 and HBVinfection Table．1 wimchrollic Charaeteristia 0f阳衄b 细胞浓度为5×1／hal。加入24孔培养板，37。C 5％C02孵箱培养2h，轻轻混匀，用尖吸管吸取培养液。 GM—C．SF 方法，在培养瓶中加入含rh 1000IU／ml、rh—IL一4 入75w,／Ⅱd的PolyI：C(北京永康制药厂生产)。共培养lo—15天，收集悬浮细胞。 3．树突状细胞Dc表型测定收集的细胞，加入File或PE标记的抗体(Beeton Becton 抗鼠16；作为阴性对照。 4．同种异体混合淋巴细胞培养(MLR)用同种异体混合淋巴细胞检测DC的免疫刺激活性。将慢 性乙型肝炎病人、HBsAg携带者及正常对照组的树突状细胞与来自于正常人的异体T淋巴细胞共同培 孔，结果以X±SD表示。 收集上清，用ELISA(试剂盒购自深圳晶美公司)法检测细胞培养上清中IL一12p70的含量。 (北京市肝炎试剂研究所生产)及1．0ug／ml胆微球蛋白(Si6na公司产品)，加入PolyI：C75ug／rrd，以不 后加入IL一230U／ml，隔天半量更换培养基，继续培养6天，收获细胞并计数，测定其功能。以单纯正 一2维持的T细胞组作为阴性对照。 (Positive Contr01)和对HBV无免疫记忆反应的阴性对照组(Negative 微镜下计数每孔呈棕黑色的斑点数，求出两复孔的平均值。以Dc作用后的T细胞组斑点数减去单纯的 IL一2维持组T细胞斑点数即为HB＆Ag抗原特异性的T细胞频数。 8．统计学分析 进行。 结果 细胞形态发生变化，部分细胞呈梭形，约48—72h之后，细胞体积逐渐变大，表面伸出较多不规则的星 状突起，在培养3～5天，细胞可出现聚集成团