测定DNA含量推断死亡时间的技术探讨.pdfVIP

全笪箜直达鎏医堂查銮远会迨塞塞 测定DNA含量推断死亡时间的技术探讨 杨利军1，陈佳旭2，褚俊1，章天驰1 (宿迁市公安局刑警支队，江苏宿迁223800) 【摘要】机体死后细胞核DNA发生降解，本文通过分析图像分析技术、单细胞凝胶电泳技术、流式细胞仪技术以 及脱氧核苜酸末端转移酶技术测定DNA含量的方法，本文对标记降解程度的原理、机体死后细胞核DNA降解的规律 以及利用上述研究方法推断血痕形成时间的应用前景进行了综述。 【关键词】法医病理学；死亡时间；DNA 损伤和死亡的时间推断是法医学鉴定的重要内容之一，采用的方法较多，其中利用血痕的形成时 间推断间接推损伤或死亡时间，国外学者已做了一些研究，如利用RT．PCR技术…和高效液相色谱方 法心1来推断血痕的形成时间等，本文旨对利用测定DNA含量及其降解程度推断血痕形成时间的研究 进行综述，以期为相关研究和应用提供参考。 1图像分析技术 图像分析技术(imageanalysis 数学形态学法原理，客观准确地以数据形式表达图像各种信息的技术。现已广泛用于天文、地理、地 质、金属、纺织、材料、集成电路、生物和医学等各个领域中¨o。在生物医学领域，60年代末期，由Wield intracellular 等开发的TICAS(tax．onomicanalyticsystem)最先用于宫颈涂片的研究。随着计算机技术的 发展，现已出现了全自动的彩色图像分析仪，并在血液细胞分类，肿瘤细胞识别，癌前病变分级等方面 得到越来越广的应用Ho。在法医学领域，2000年刘良等{1首次报道了应用I。AT测定大鼠脑、肝、肾、 脾、肺、心肌细胞DNA含量的变化，并探讨与死亡时间之间的关系，认为利用LAT测定细胞核DNA各 种参数变化，对于推断死亡时问有一定的优势。尽管图像分析技术(LAT)有可重复性好、操作简单等 优点，但是也受到多种因素的影响如现色时间、图像和数据的处理等，所以用图像分析技术(LAT)推断 血痕形成时间应尽量避免上述因素的影响。 2单细胞凝胶电泳技术 伤的定量检测方法，该方法通过观单个细胞核DNA电泳特征直接分析其降解程度，因降解的DNA片 段在电场中向正极移动，形成类似“彗星”形图像，故得其名。彗星尾部的光密度代表降解DNA片段的 量，尾长度则与降解片段的大小有关。通过测定迁移光密度和迁移距离可以推定DNA的损伤程度。 SCGE技术自出现以后继续的到更进一步开发研究与应用，目前，使用的分析软件主要有英国 备配套使用，价格昂贵，因此，国内多镜下分级和测量彗星长度的方法，这类方法虽然方便实用，但其主 观性强、定量化程度不够。籍涛¨…、朱志良…o研制了新型的SCGE分析系IMI1．0，比Zeiss公司KS400 彗星分析系统使用更为方便、分析速度更快、结果准确、更便于统计分析，并具有多光谱融合功能、中英 文可切换界面和多格式输出打印的特点。何远¨引认为利用单细胞凝胶电泳可直接检测死后细胞核 DNA的降解情况，且尾长、尾矩与死亡时间相关性良好，可用于死亡时间尤其是早期死亡时间的推断。 20 法医病理学 能被检测出来…j，故笔者认为在血量非常少的刑事案件中，可利用SCGE对血痕的形成时间进行推断。 3流式细胞仪技术 流式细胞仪(flow 来的一种快速对单细胞总量分析和分选的新技术¨“。其原理是将待测细胞制备成单细胞悬液，经特异 性荧光染色后在清洁气体的压力下进人充满鞘液的流动室，使细胞排列成单列由喷嘴喷出，形成细胞 溶液柱；液柱与垂直入射的高度聚焦激光相交，细胞散射光和激发产生的荧光被收集并转换为电信号 后用相应的应用软件进行分析处理，得到相关信息。因该技术测量速度快，且能对细胞进行分类测量， 在DNA定量测定中得到广泛应用。1989年国内齐凤英¨副报道了使用Fc定量检测大鼠死后DNA含 的优点是可以对单个细胞进行快速定量分析及分选的技术，具有分析的多参数性、快速性及分选的高 纯度性等特点，在医学领域中得到越来越广泛的应用，对血痕时问的推断应有较好的应用前景。 4脱氧核苷酸末端转移酶技术 脱氧核苷酸末端转移酶(terminal deoxynucleotidyl 离的脱氧核苷酸插入到DNA链的3’．OH末端¨“。DNA双链断裂或只要1条链上出现缺