文献综述正文.docVIP

茯苓多糖的研究进展及超微技术在医药和食品中的应用 摘 要：茯苓（Poria cocos wolf）是我国常用的传统中药材，经提取分离纯化后得到的以β-(1，3)葡萄糖聚合体为主要成分的茯苓多糖具有补体激活、抗诱变、抗肿瘤和提高机体免疫活性等多种活性功能。此外，超细粉体技术可广泛地应用于医药和保健食品行业，通过原料进行超细加工，得到功能性超细保健食品，实现“医食同源”，从而达到健康及延年益寿的目的。 关键词：茯苓多糖；药理作用；超微粉碎 1． 茯苓多糖的研究进展 茯苓（Poria）为多孔菌科植物的干燥菌核，见图1 : 图1茯苓菌核 Fig.l Poria cocos wolf 原植物为Poria cocos（Schw.) Wolf (β-pachy-man)，由于产地差异，含量在80％～94％之间不等，为具有β-(1→6)葡聚糖支链的β-(1→3)-D-葡聚糖，尚含有茯苓木聚糖。β-茯苓聚糖并无抗肿瘤活性，但切除β-(1→6)支链后，即可得到茯苓多糖（β-pachymaran）（李萍和何俊蓉，2004）。 由于野生茯苓资源有限，目前国内主要采用人工栽培方法培养茯苓。茯苓的人工栽培，在我国己有1500多年的历史。最早始于南北朝，但所产菌核很小，质量也差。到了宋朝栽培技术明显改进，始用“肉引”种苓，使产量和品质均大有提高。近年来，因为“肉引”需要大量的种苓，已用人工培养的纯菌种代替。然而，段木栽培茯苓所用的原料松树生长缓慢，加上采用人工栽培方法培养茯苓菌核耗费时间较长，一般在接种后8～10个月才成熟。通过液体深层发酵（Submerged Fermentation）技术获得菌丝体，是目前国内外普遍采用的一种工业化方法。目前已有多种食用菌成功地进行发酵生产且有产品投放市场，如灵芝、香菇、金针菇和侧耳等（杨革，1997）。而茯苓的液体发酵生产正在开发研究中，报道相对较少。 2．茯苓多糖研究概述 2.1 茯苓多糖的提取分离和纯化 2.1.2 茯苓多糖的提取 动、植物及微生物多糖，细胞组织外大多有脂质包围，因此提取时首先要除去表面脂肪。原料经粉碎后用丙酮、乙酸乙酯、乙醚或甲醇等有机溶剂进行水浴加热搅拌或索氏回流提取4h以上。原料脱脂后按照多糖的溶解性采用乙醇水溶液提取、水（冷水或热水）提取、中性盐溶液提取、酸和碱提取（提取应在低温下进行，时间宜短）、水解酶提取以及超声提取等方法进行提取。 2.1.2.1水溶性多糖的提取 称取150g茯苓粉末，按正交设计的用酶量加入适量的木瓜蛋白酶，加入5倍量的水提取，方法见下图2。 提取方法：开始先升温至600C，在60℃～70℃保持40min，后在沸水中提取1 h，离心，分出上清液，再用5倍量的水提取一次，合并两次的提取液减压浓缩至原体积的1/10，用Severge法除蛋白，至少得重复6次以上;清液再减压浓缩，而用3倍量的乙醇沉淀多糖，于冰箱中静置过夜，离心，得沉淀物，干燥，Smith降解，透析，真空干燥，备用。 2.1.2.2 碱溶性多糖的提取 用稀碱（0.5mol/L，0.75mo1/L，1.0mo1/LNaOH的水溶液）分别处理水提后的茯苓渣，方法同图2。 方法：把用水提后的茯苓渣分别用5倍量的碱液置于不同的温度下浸泡4h，此时溶液呈粘稠状，离心得上碱液I，把渣再用3倍量的碱液提取一次，所得碱液I与II合并，抽滤，滤液以10％的醋酸液中和至pH=6，再加入3倍量的9％乙醇，于4℃放置过夜，离心得沉淀，Smith降解，流水透析两天，再依次用蒸馏水、无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤后，真空干燥，备用（黄才欢等，2003）。 图2 茯苓多糖的提取工艺流程 2.2.2 茯苓多糖的纯化 2.2.2.1脱脂 粗多糖中的脂肪采用索氏抽提法脱除。 2.2.2.2脱蛋白 (1) Sevag法（黄才欢，2002） 根据蛋白质能在氯仿等有机溶剂中变性的特点，按多糖水溶液体积的1/3～1/4加入Sevage试剂（氯仿︰正丁醇=4︰1～5︰1），振荡20分钟，离心沉降分去水层与溶剂交界处的变性蛋白质，重复3－5次，直至除尽蛋白质。 (2) 三氯乙酸一正丁醇法 按多糖水溶液体积的加入1︰1体积的5%三氯乙酸一正丁醇液，摇匀，在分液漏斗中静置分层后，分出下层清液，除去上层正丁醇层及中层杂蛋白。下层清液用2mol/L的NaOH溶液中和至中性。 (3) 蛋白酶法 经Sevage法或三氯乙酸一正丁醇法脱蛋白的多糖液调pH至中性，加木瓜蛋白酶适量，60℃～70℃保温2h后，升温至80℃灭酶。 2.2.2.3透析 脱脂、脱蛋白、脱色后多糖液装入透析袋中，对自来水流水透析24h～72h，对蒸馏水透析12h～24h。 经凯氏定氮法测定：茯苓的水溶性提取物中，蛋白质约占总干物的3.63％，而纯化前的茯苓多糖含蛋