液相故障及排除.docVIP

高效液相色谱常见故障的判定及解决方法 (一)保留时间变化 1.柱温变化 柱恒温，必要时需配置恒温箱 2.等度与梯度间未能充分平衡 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱 3.缓冲液容量不够 用25mmol/L的缓冲液 4.柱污染 每天冲洗柱 5.柱内条件变化 稳定进样条件,调节流动相 6.柱快达到寿命 采用保护柱 (二)保留时间缩短 1.流速增加 检查泵,重新设定流速 2.样品超载 降低样品量 3.键合相流失 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向 4.流动相组成变化 防止流动相蒸发或沉淀 5.温度增加 柱恒温 (三)保留时间延长 1.流速下降 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡 2.硅胶柱上活性点变化 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱 3.键合相流失 同前(二)3 4.流动相组成变化 同前(二)4 5.温度降低 同前(二)5 (四) 出现肩峰或分叉 1.样品体积过大 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% 2.样品溶剂过强 采用较弱的样品溶剂 3.柱塌陷或形成短路通道 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 4.柱内烧结不锈钢失效 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 5.进样器损坏 更换进样器转子 (五)鬼峰 1.进样阀残余峰 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗 2.样品中未知物 处理样品 3.柱未平衡 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱) 4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂 5.水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水 (六) 基线噪声 1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压 2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂 3.检测器灯连续噪声 更换氘灯 4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等) 5.检测器中有气泡 流动相脱气,加柱后背压 (七)峰拖尾 1.柱超载 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相 2.峰干扰 清洁样品,调整流动相 3.硅羟基作用 加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品 4.同前(四)4 同前(四)4 5.同前(四)3 同前(四)3 6.死体积或柱外体积过大 连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管 7.柱效下降 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱 (八)峰展宽 1.进样体积过大 同(四)1 2.在进样阀中造成峰扩展 进样前后排出气泡以降低扩散 3.数据系统采样速率太慢 设定速率应是每峰大于10点 4.检测器时间常数过大 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10% 5.流动相粘度过高 增加柱温,采用低粘度流动相 6.检测池体积过大 用小体积池,卸下热交换器 7.保留时间过长 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱 8.柱外体积过大 将连接管径和连接管长度降至最小 9.样品过载 进小浓度小体积样品 现 象? ?? ?? ?? ?? ? 主要原因? ?? ?? ?? ?措 施 A??输液不稳定 泵的脉流大 1。泵头内进入气泡。 ●按pump ，驱出气泡。●排液管连接口连接注射器抽出气泡。 2。泵头内存有以前的流动相。 ●按 pump ，将旧流动相完全清洗出去。 3．吸滤器的管内进入气泡。 ●按 pump ，将旧流动相完全清洗出去。●震动吸滤器，驱出气泡。●吸滤器网眼堵塞时，用超声滤清洗。超声滤清洗无效时，需更换。(检查吸滤器网眼堵塞的方法 取出过滤部分，记录压力波形。 如果取出后压力波形不正常，则吸滤器网眼堵塞。 ) ●对流动相脱气。 4。单向阀工作不正常 ●输送异丙醇，清洗单向阀。●清洗无效时，用超声波清洗单向阀，或更换单向阀. 5．泵头与泵头座之间的缝隙，或清洗液出口漏液 ●更换柱塞密封圈。●更换柱塞密封圈后仍漏液时，更换柱塞。 6．流路的连接处漏液 ●用力拧紧公螺母。●拧紧后仍漏液时，更换公螺母和箍环。 7．流路堵塞，或将要堵塞。 ●管道过滤器用超声波清洗，或更换过滤器。●找出堵塞的部件，更换新部件。 8。柱塞密封圈的使用寿命将到极限。 ●更换柱塞。 B??流量比设定值小 1．单向阀工作不正常。 ●输送异丙醇，清洗单向阀●清洗后仍无效时，用超声波清洗单向阀，或更换单向阀。2．吸滤器网眼堵塞。(*2) ●用超声波清洗吸滤器。超声波清C??洗无效时，更换吸滤器。 保留时间的再现性不良 1．单向阀工作不正常。 ●清洗仍无效时，更换单向阀，或用超声波清洗。D??高压梯度时2台输液泵的压力表示不一致 (相差在±0．5MPa(5kSf／cm2)或±2％以内属于正常) 1．压力传感器的零点未对准。 ●用辅助功能ZER。 ADJ，