液质联用(HPLCMSMS)分析鉴定西地那非和他达拉非的补.docVIP

液质联用（HPLC/MS/MS）分析鉴定西地那非和他达拉非的补充检验方法 【鉴别】取供试品适量，按照定性及含量测定项下方法试验，若供试品HPLC色谱峰保留时间与西地那非或他达拉非对照品色谱峰一致，并且供试品该色谱峰液质联用的一级质谱及二级质谱均与相应西地那非或他达拉非对照品一致，则确认供试品中含有西地那非或他达拉非。 【定性及含量测定】本品定性分析采用液质联用法(HPLC／MS／MS)，见《中华人民共和国药典2005年版二部》附录IX J；含量测定按照高效液相色谱法，见《中年人民共和国药典2005年版二部》附录VD。 液质联用条件 使用以十八烷基键合硅胶为填充剂的液相色谱柱(柱头加装相同规格填料的预色谱柱)，以0．01mol／L乙酸铵水溶液／乙腈／甲醇 (35：10：55)为流切相，检测波长为254nm，进样量10μL，西地那非和他达拉非的理论塔板数均不小于2000，分离度大于1.5；质谱装配电喷雾电离源（ESI），源电压5KV，毛细管温度275℃，毛细管电压15V，鞘气流速40arb；正负离子同时检测，扫描方式采用全扫描一级质谱、全扫描二级质谱（MS／MS），质量采集范围100～1000。 对照品溶液的制备与测定 分别精密称取西地那非和他达拉非对照品适量（约5mg)，置于50mL容量瓶中，加入上述流动相溶液适量，超声10分钟使之溶解，放冷至室温，用流动相溶液定容至刻度混匀，将上述两种溶液按照1：1的比例混合均匀作为贮备液。将该贮备溶液用流动相溶液稀释制备系列标准溶液（浓度分别为50μg/mL、25μg/mL、10μg/mL，5μg/mL，1μg/mL），分别取10μL注入液相色谱仪，进行液质联用分析，记录液相色谱图及一级质谱与二级质谱图，依据西地那非和他达拉非系列标准溶液浓度及液相色谱紫外检测峰面积，建立拟合方程，计算相关系数（r值不小于0.99）。 供叶品溶液的制备与测定 若供试品为片剂，称量后细致研磨粉碎，然后适量称取（约300mg）加入50mL容量瓶中，先加入约45mL上述流动相溶液，超声提取10分钟，放冷至室温，加入流动相溶液定容至刻度，混和均匀；若供试品为胶囊，取出内容物细致研磨粉碎，然后适量称取(约300mg)加入50mL容量瓶中，先加入约45mL上述流动相溶液，超声提取10min，放冷至室温，加入流动相溶液定容至刻度．混匀：若供试品为大蜜丸，称量整个蜜丸的质量，再将蜜丸粉碎成小颗粒，全部加入100mL容量瓶中，先加入约90mL上述流动相溶液，超声溶解，直至溶液中无大颗粒状物质，放冷至室温，加入流动相溶液定容至刻度，混匀：供试品为口服液，量取10mL加入50mL容量瓶中，再加入约30mL甲醇超声提取10min，放冷至室温，加入乙腈定容至刻度，超声混匀，置于冰箱中冷藏过夜。 上述样品溶液经过夜沉淀后取上层溶液适量，高速离心（不小于10000rpm），取上清液用上述流动相溶液稀释10～100倍，取10μL进行液质联用分析，记录液相色谱图及一级质谱与二级质谱图。通过与对照品液相色谱图及一级质谱与二级质谱图的对比，确定供试品中是否含有西地那非（C22H30N6O4S）或他达打拉非（C22H19N3O4）；通过液相色谱图紫外吸收的积分峰面积，代入上述拟合方程，计算供试品中西地那非（C22H30N6O4S）或他达拉非(C22H19N3O4)的重量百分含量。 *附：西地那非和他达拉非结构信息 （1）中文名称：西地那非 英文名称：Sildenafil CAS登记号：139755-83-2 结构式： 分子试：C22H30N6O4S 精确质量：474.20 分子量：474.58 （2）中文名称：他达拉非 英文名称：Tadalafil CAS登记号： 171596-29-5 结构式： 分子试：C22H19N3O4 精确质量：389.14 分子量：389.40