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AOZ酶联免疫抗体饲料动物组织论文 【提示】本文仅提供摘要、关键词、篇名、目录等题录内容。为中国学术资源库知识代理，不涉版权。作者如有疑义，请联系版权单位或学校。 【摘要】本论文对呋喃唑酮及其代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)兽药残留的酶联免疫检测方法进行了的研究。合成了针对呋喃唑酮原药和代谢物的衍生物3-(2-硝基苯亚甲基)-氨基-2-恶唑烷酮(NPAOZ)均具有高度类似性的半抗原3-[(4-羧基苯基)-甲基]氨基-2-恶唑烷酮(CPAOZ),用活性酯法和混合酸酐法连接蛋白作为免疫原,比较其免疫效果。在间接酶联免疫检测方法中,异源包被原是将呋喃唑酮原药的硝基还原成氨基后用戊二醛法连接蛋白OVA获得。由活性酯法连接的免疫原得到的血清对NPAOZ口呋喃唑酮均表现了良好的亲和力,IC50分别为2.5μg/L和2.0μg/L,检出限(IC15)分别为0.25μg/L和0.09μg/L。在直接酶联免疫竞争优化中,抗体表现出更低的检出限,IC15分别为0.02μg/L和0.05μg/L,相应的IC50分别为2.1μg/2.8μg/L。抗体展现了良好的特异性,与其他的硝基呋喃原药、相应代谢物、结构类似物均无交叉反应。由于在体内易分解的呋喃唑酮经常被不合法的应用于动物养殖过程中,导致具有致癌、致突变性的代谢物AOZ残留,本实验选取了动物饲料和动物组织分别作为呋哺唑酮和其代谢物AOZ研究对象,包括：鸡饲料、猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鸡肝、虾。检测方法较之前的方法灵敏性更高,方法在三个不同的添加浓度1,5,20μg/kg,鸡饲料、猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鸡肝、虾的回收率在76%-109%之间,相对标准偏差4.7%-11%之间。通过高效液相色谱检测方法,对建立的呋喃唑酮及其代谢物AOZ的直接竞争酶联免疫检测方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果的一致性很高,线性相关系数R2值在0.99以上,表明所建立的检测呋喃唑酮及其代谢物AOZ的酶联免疫方法是准确、有效、可信的,并非常适用于饲料中呋喃唑酮及动物性食品中呋喃唑酮代谢物AOZ的定性及定量检测。 【关键词】呋喃唑酮；AOZ；酶联免疫；抗体；饲料；动物组织； 【篇名】呋喃唑酮及其代谢物酶联免疫检测方法的研究 【目录】呋喃唑酮及其代谢物酶联免疫检测方法的研究 摘要 4-5 ABSTRACT 5 1 前言 9-16 1.1 硝基呋哺类药物概论 10-11 1.2 呋喃唑酮药物概论 11 1.2.1 呋喃唑酮的理化性质 11 1.2.2 呋哺唑酮的毒性作用 11 1.2.3 呋哺唑酮对食品的污染及残留限量 11 1.3 硝基呋喃类抗生素残留检测方法 11-14 1.3.1 高效液相色谱法 12-13 1.3.2 液质联用技术 13 1.3.3 免疫分析法 13-14 1.4 论文研究的意义及目的 14-15 1.5 论文研究内容 15-16 2 材料与方法 16-28 2.1 实验材料 16-18 2.1.1 主要药品和试剂 16-17 2.1.2 主要仪器与设备 17-18 2.1.3 待测样品 18 2.1.4 常用溶液的配制 18 2.2 实验方法 18-28 2.2.1 呋哺唑酮半抗原的合成 18-19 2.2.2 半抗原连接蛋白 19-20 2.2.3 免疫程序 20-21 2.2.4 抗血清效价及亲和性的测定 21 2.2.5 抗体的纯化 21-22 2.2.6 抗体特异性的测定 22 2.2.7 直接竞争酶联免疫检测方法的建立 22-24 2.2.8 直接竞争ELISA检测方法性能指标的评价 24 2.2.9 用于ELISA分析的样品处理方法 24-25 2.2.10 用于液相色谱分析的样品处理方法 25-26 2.2.11 仪器分析法确证 26-27 2.2.12 直接竞争ELISA稳定性实验 27-28 3 结果与讨论 28-54 3.1 免疫半抗原的设计 28-29 3.1.1 间隔臂的选择 28-29 3.1.2 载体的选择 29 3.1.3 交联方法的选择 29 3.1.4 最佳交联比 29 3.2 半抗原合成的鉴定 29-33 3.2.1 3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)表征 30-31 3.2.2 半抗原CPAOZ表征 31-33 3.2.3 半抗原3-[(5-氨基-呋喃-2-甲烯基)-氨基]-氧杂噁唑-5-酮的表征 33 3.3 完全抗原的鉴定 33-34 3.4 抗血清的制备和鉴定 34-36 3.4.1 抗血清的制备 34 3.4.2 抗血清效价的测定 34-35 3.4.3 抗血清亲和性的测定 35-36 3.5 抗体特异性 36-37 3.6 抗体的纯化 37-38 3.7 直接竞争酶联免疫检测方法的建立 38-43 3.7.1 酶标抗原浓度优化 38-39 3.7