甲醇在白斑狗鱼精液冷冻保存中的应用的研究.pdfVIP

auratus (Carassius 1型干扰素。利用原核表达系统，制备了纯化的、具有生物学 胱氨酸，属于group 活性的重组干扰素(rlFN)，免疫小鼠获得了抗鲫IFN蛋白的多克隆抗体。用rlFN 直接处理CAB细胞或在CAB细胞中过量表达IFN，都能诱导细胞关键ISGs的表达 从而建立宿主细胞的抗病毒状态。向细胞加入抗IFN蛋白的多克隆抗体，能显著 I：C诱导宿主 抑$+JrlFN诱导的细胞ISGs基因的表达和抗病毒状态的形成。对Poly I：C诱导的抗病毒作用首先需要细胞 细胞建立抗病毒状态的机制的研究证实Poly 合成IFN，产生的IFN再诱导ISGs的表达，从而建立宿主细胞的抗病毒状态。进 一步研究鱼类IFN发挥抗病毒作用的信号通路发现：在过量表达CalFN或直接用 rlFN处理的细胞中，转染Statl野生型质粒能诱导ISRE载体荧光素酶活性的增加、 抑制病毒能力增强、 ISGs基因表达水平升高；相反，转染Statl缺失型质粒导致 胞内Statl功能失活的细胞，ISRE荧光素酶活性、抑制病毒能力和ISGs的表达水 平都显著降低。这说明鱼类IFN通过Statl通路调控ISGs的表达，从而发挥抗病毒 作用。另外，本研究揭示了特异于鱼类的干扰素正反馈表达调控机制。鲫IFN能 够直接诱导自身表达，且通过Statl途径，证明鲫IFN基因本身应该是一个ISG。 鱼类IFN的这种正反馈机制对快速响应病毒感染、从而建立一种迅速而广泛的抗 病毒状态具有重要意义。本研究提供的证据表明，从低等的鱼类到高等哺乳类， 脊椎动物干扰素通过保守的Statl信号通路发挥抗病毒功能。 反馈机制、重组蛋白、转染 甲醇在白斑狗鱼精液冷冻保存中的应用研究 张俊杰1，李胜忠1，倪剑27鄢庆枇3，库尔班·吐拉克1，李帅1，李文娟1 (1．新疆农业大学动物科学学院，乌鲁木齐，830052：2．新疆赛湖渔业科技开发有限公司， 博乐，833400；3．集美大学水产学院，厦门，361021) 1、目的：近年研究结果表明甲醇对许多种鱼类的精液冷冻保存效果都明显 优于二甲亚砜等其它几种冷冻保护剂。白斑狗鱼是我国仅分布于新疆的一种大型 经济鱼类，关于自斑狗鱼精液冷冻保存的相关研究已经取得了较好的成绩，筛选 出了几种冷冻稀释液。但这些稀释液或组成复杂，或效果不理想，而以甲醇作为 冷冻保护剂、组成简单的精液稀释液尚未见报道。为了开发基于甲醇、组成简单 的精液稀释液，本文主要研究以下两个方面：(1)2种冷冻保护剂(二甲基亚砜， 甲醇)、2种基础溶液(葡萄糖，蔗糖)和2种精卵比例对白斑狗鱼冻精受精率 的影响。(2)甲醇的不同添加水平对白斑狗鱼冻精精子活率、受精率的影响，以 及10％甲醇的稀释液对繁殖苗种生长性状的影响。 93 2、方法：(1)精液稀释液配制：实验一采用0．6M蔗糖+15％DMSO，O．3M葡 萄糖+15％DMSO。0．6M蔗糖+10％甲醇，0．3M葡萄糖+10％甲醇，再分别添加 适量鸡蛋黄和氯化钾作为精液稀释液；实验二分别以0、5、10、15％的甲醇作为 冷冻保护剂，再分别添加0．3M的葡萄糖，适量鸡蛋黄和氯化钾作为精液稀释液。 (2)精液的采集和冷冻保存：将从白斑狗鱼精巢中挤出的精液分别用不同的稀 释液进行稀释，并迅速用0．5ml的麦管分装，封口后在距液氮面2cm处降温5min， 然后放置在液氮内。(3)精子活率检测：将精子悬液与等量0．5％伊红染液混匀， 在显微镜下计数着色精子和未着色精子，以未着色精子占精子总数的比例为精子 活率。(4)人工授精和孵化：将冻精在25℃水浴锅中解冻，迅速加入到新鲜成 熟卵子内，同时加入适量授精液进行混合，然后在水泥池中进行流水孵化，达到 发眼期后进行受精的计算率，相对受精率是实验组受精率与相应对照组受精率的 比值。(5)苗种培育：对利用鲜精和采用10％甲醇冷冻保存的冻精繁殖出的鱼苗 在室内水泥池中进行培育，24天后进行成活率计数和体重、体长的测定。 3、结果：(1)在实验(一)中，冷冻保护剂种类对白斑狗鱼冻精的受精能力影 响显著性，采用10％甲醇为冷冻保护剂的冻精总相对受精率(93．2士8．7％)显著 高于采用15％二甲亚砜为冷冻保护剂的冻精总实