产气荚膜梭菌α-β2-ε毒素融合蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性研究.pdfVIP

第 37卷 第2期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．37．No．2 2015 年 2 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Feb． 2015 doi：10．3969~．issn．1008-0589．2015．02．11 产气荚膜梭茵 OL—I32一￡毒素融合蛋白在大肠杆菌中的 表达及免疫原性研究 宫旭颖，葛俊伟 ，乔薪瑗，唐丽杰，姜艳平，崔 文，李一经 (东北农业大学 动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030) 摘 要：为研究产气荚膜梭菌 、p、83种主要外毒素的免疫原性，构建基因亚单位多价疫苗，本研究通过 PCR分别扩增 仅-132及 ￡3种毒素基因，分别克隆于pProHTa载体 中构建重组表达质粒 pPro．．132．￡，并转化大肠 杆菌进行这 3个 目的基因的融合表达。SDS—PAGE分析显示，表达的 ．312．￡毒素融合蛋 白大小约90l(u，主要 以 包涵体形式存在。将其免疫BALB／c小鼠后，分别利用A型和B型产气荚膜梭菌强毒素对免疫鼠进行攻毒，并测 定免疫鼠血清中抗体对毒素的中和活性。结果表 明，免疫鼠对A型和B型产气荚膜梭茵毒素 1LD。。和 2LD。。。的 攻毒保护率分别为 100％和60％以及 100％和 80％。体外中和试验显示，免疫鼠血清稀释为 1：20时，对 1LD A型和B型产气荚膜梭菌毒素的中和效率均可达到 lo0％。以上结果表 明，本研究制备的ol一312—8融合蛋 白具有 良好的免疫原性 ，能够有效刺激机体产生中和抗体 ，可以作为基 因工程疫苗的有效组分 ，为产气荚膜梭菌多价候 选亚单位疫苗的研究奠定 了基础 。 关键词：产气荚膜梭菌；仅312．8毒素；大肠杆菌；融合表达；免疫原性 中图分类号 ：$852．61 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(2015)02．0128。04 ExpressionofOL—toxin，p2一toxin，e-toxinfusionproteinof UJ一lo‘strt■d■ium pe，．7，竹●ngensI●n I-■一．COi■l●and■l■t●S l■mm UnOqenl●CI●tJV GONGXu-ying，GEJun—wei，QIAOXin-yuan，TANGLi-jie，JIANGYan-ping，Cu1wen，LIYi-jing* (CollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAg—culturalUniversity，Harbin150030，China) Abstract：ToinvestigatetheimmunogenieityofthemajortoxinsofClostridiumperfringens，the 一，312，s—toxingeneswere amplifiedbyPCR，respectively，andligatedintopProHTavectoraccordinglyforexpressionofthe仅一132—8toxinfusionproteinin E．coli．TheSDS—PAGE analysisshowed thattheufsion proteinwasabout90kumainly in theofrm ofinclusionbody．Then， BALB／cmiceat6-8weeksoldwereimmunizedwiht inclusionboay andchallengedwiht typeA andtypeB ofC．perfringens， respectively．Theprotectionrateinimmunizedmicechallengedwiht 1LD100and2LD100oftypeA ofC．perfringenswere 100％ and 60％ ，andtheprotection rateswere 100％ and 80